论文部分内容阅读
近年来,痛风的发病率逐年上升,年轻化趋势明显,严重影响人类健康。痛风除引发的晶体性关节炎等疾病,往往还伴随着心脑血管疾病、高血压、糖尿病等疾病,甚至导致肾衰竭,临床治疗痛风的西药常常伴有发热、皮疹、并对肝肾造成严重的负担,依赖性强、易反复,而药用植物活性成分更为安全,且药理作用广泛,毒副作用轻微,人体耐受性高,为开发预防和缓解痛风功能性食品提供了更多选择。本文采用沸水浸提及超声辅助70%乙醇浸提两种工艺对临床治疗痛风常用药用植物以及药食同源植物荷叶、银杏叶、虎杖、赤芍、丹皮、葛根、老鹳草成分进行提取,对其组成成分、体外降尿酸效果进行测定,并分析其相关性。以尿酸代谢酶为靶蛋白,采用分子对接技术模拟评价小分子化合物与代谢关键酶的结合情况,进而评价各药用植物降尿酸效果,虚拟筛选效果较好的药用植物及小分子物质,为进一步提取分离活性成分,开发预防缓解痛风功能性食品打下基础。检测14种提取物中黄酮类、多酚类、多糖类活性成分的含量,葛根水提物提取率最高,达45.24%,总黄酮含量最高的为虎杖醇提物,达3.55%。总酚含量最高的为银杏叶醇提物,为6.51%。采用紫外分光光度法测定植物提取物体外降尿酸活性,发现虎杖醇提物的XOD抑制活性显著高于其他提取物,IC50为2.366 mg/mL。分析活性物质含量与黄嘌呤氧化酶抑制活性的关系,发现总糖含量与降尿酸活性无相关性,而总黄酮含量与降尿酸活性总体呈线性相关关系。采用分子对接技术将来源于虎杖、银杏叶、荷叶、丹皮、赤芍五种体外降尿酸效果较好的药用植物中小分子化合物分别与黄嘌呤氧化酶（XOD）、腺嘌呤核苷脱氨酶（ADA）以及嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）进行分子对接以筛选具有降尿酸效果的小分子物质,结果得到结合活性高于酶所对应阳性抑制剂的小分子物质42、18、10个。其中对XOD抑制剂中30.35%来源于虎杖,26.78%来源于银杏叶;ADA抑制剂荷叶组分占35.00%,其次虎杖小分子占30.00%,银杏叶小分子占25%;PNP抑制剂虎杖组分占35.71%,与体外抑制实验一致,虎杖中的小分子成分较好的进入尿酸代谢酶的活性口袋,解释了虎杖具有较好的降尿酸效果;分子对接结果显示3,4,3’,5’-四羟基二苯乙烯-3-葡萄糖苷和儿茶素木犀草素-7-O-葡萄糖苷、表儿茶素、Cosmetin、儿茶素、（-）-儿茶素及虎杖苷对于XOD、ADA和PNP具有协同作用的效果,表明药用植物降尿酸具有多靶点作用。本文通过对活性成分含量测定,体外降尿酸实验以及分子对接虚拟筛选降尿酸效用的小分子化合物,为进一步提取分离活性物质提供有力的支持,以期更好地利用药用植物,为开发预防痛风的功能性食品打下基础。