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在人体内,血糖的产生和利用是一种动态变化的过程,正常人的血糖值在一定范围内平衡波动。目前,我国糖尿病的诊断标准为,当空腹血糖值大于 7.2 mmol/L 或是餐后血糖值大于 11.1 mmol/L。稳定的血糖值对人身体的健康意义重大,但随着环境的变迁和生活水平的提高,我国糖尿病的患病率飞快上升,特别是2型糖尿病,高血糖及其诱发的一系列并发症给患者带来极大的痛苦,严重影响正常生活。治疗上一般采用双胍类及磺脲类等,但随之带来的继发性失效与副作用都限制了其应用,如服用二甲双胍后会出现腹泻、恶心的反应,氯磺丙脲服用时间长后容易产生低血糖等。 近年来,人们积极探索天然来源的降血糖活性成分,目前报道已有超过 200种的植物具有抗糖尿病的功效,其中就包括玉竹,而多糖作为玉竹中的活性成分之一,极有可能具有降血糖的潜能,具有良好的开发应用价值。因此,本课题从药食两用的传统中药玉竹中分离出一种具有降血糖活性的多糖,并对其纳米乳剂的降血糖活性进行研究。 第一章 综 述 本章对中药玉竹近年来相关研究进行汇总,重点综述了玉竹多糖的提取方法、分离纯化途径、理化性质以及相关生物活性研究进展。同时对多糖类相关新型剂型进一步综述,如多糖脂质体、多糖纳米粒、多糖纳米乳、多糖微丸及微囊。也对目前糖尿病的现状和治疗预防糖尿病的多糖进行了综述。最后提出了本论文的选题依据及创新点,为后续的工作思路奠定了基础。 第二章 玉竹多糖的提取分离纯化 本章通过水提醇沉法得到玉竹粗多糖,Sevag 法进行除蛋白,分别用不同极性的有机溶液洗涤、透析去除脂溶性小分子杂质后得到玉竹粗多糖 YZC。YZC经 AB-8 大孔吸附树脂初步分离纯化,得到一水洗脱组分 YZ-fr2,YZ-fr2 再经DEAE-52 纤维素柱层析进一步分离纯化后得 YZ-2 玉竹多糖,其分子量相对均一,冻干后为质地疏松的白色粉末。经检测,YZ-2的多糖含量为84.39%,蛋白质含量为0.68%,糖醛酸含量为0.57%。通过紫外分光光度法与高效液相色谱法鉴定,发现YZ-2几乎不含蛋白、核酸、色素及小分子等杂质,具有较高的纯度,为论文后续的工作奠定了基础,为从天然产物中分离纯化多糖提供了参考。 第三章 玉竹多糖YZ-2的结构特征初步研究 本章对分离纯化得到的玉竹多糖 YZ-2 的初级结构进行表征。通过分子量测定、单糖组成分析、高碘酸氧化、刚果红试验、核磁共振、扫描电镜、原子力显微镜等化学和仪器手段对玉竹多糖的初级结构进一步解析。HPLC结果表明YZ-2的分子量大约为5345.3 Da。主要含有甘露糖、半乳糖、葡萄糖和少量的阿拉伯糖,其摩尔比为1.000:1.995:0.334:0.074。YZ-2的高碘酸氧化实验结果表明YZ-2主要由1→2或1→4糖苷键组成,高达55%,并且含有1→6和1→3糖苷键。刚果红分析可知YZ-2无三螺旋结构。综合红外光谱与NMR图谱分析YZ-2的组成单糖是 α-D-吡喃型,很少或不存在 β-糖苷键,并且无糖醛酸吸收峰,与糖醛酸含量测定吻合。扫描电镜SEM显示YZ-2呈片状、块状,表面紧密平整,有大小不一的孔隙分布。原子力显微镜AFM分析推测YZ-2玉竹多糖分子糖链是相互聚集并存在分支的。本研究填补了玉竹多糖结构解析方面的空白,为进一步深入研究玉竹结构与活性的关系提供依据。 第四章 玉竹多糖降血糖的研究 本章通过建立高脂高糖饲料喂养联合注射小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导的方法建立2型糖尿病小鼠模型,研究分离纯化得到的YZ-2玉竹多糖组分对糖尿病小鼠的降血糖活性。结果发现,持续给药4周后,YZ-2(100、200、300 mg/kg/d)能显著增加因糖尿病而减少的体重,降低血糖,改善葡萄糖耐受能力,改善T2DM小鼠的胰岛素抵抗,通过对血脂指标的测定可知,YZ-2 能降低糖尿病小鼠血清中的TC(200、300 mg/kg/d)、TG (100、200、300 mg/kg/d)及LDL-c (100、200、300 mg/kg/d)含量,同时增加 HDL-c (100、200、300 mg/kg/d)含量,改善糖尿病小鼠的血脂代谢紊乱症。还可以通过提高 SOD (100、200、300 mg/kg/d),CAT (200 mg/kg/d)等抗氧化酶的活性和提高GSH (100、200、300 mg/kg/d)水平来改善氧化应激的不平衡。从组织病理学观察,YZ-2 还能保护肝脏和胰腺组织免于氧化损伤并维持组织的完整性。因此,YZ-2对高糖高脂饮食联合STZ诱导的2型糖尿病小鼠具有明显的治疗作用,为探索玉竹多糖在糖尿病小鼠体内降血糖机制以及进一步开发利用成为预防或治疗糖尿病新药提供一定的理论依据。 第五章 玉竹多糖纳米乳的制备及其性质研究 本章根据纳米乳形成的条件及机理,通过对形成纳米乳的过程观察,对制备的纳米乳外观及性质的判断,结合伪三元相图,筛选出合适的表面活性剂、助表面活性剂、油相种类及各自比例,确定了 YZ-2 玉竹多糖纳米乳的最佳处方为Tween80 :Span80 :无水乙醇 :油酸乙酯 :水溶液 =32 :8 :8 :27 :25 (K=4 :1,Km=4 :1)。制备出的YZ-2玉竹多糖纳米乳为淡黄色透明液体,容易被苏丹红染料染成红色,且能被大量油相稀释且保持透明无分层态,证明制备的 YZ-2 玉竹多糖纳米乳为 W/O 型纳米乳。透射电镜观察其形态呈大小均一的类球形,由内外两相组成,符合W/O型纳米乳的特征形态,粒径经测定为58.25 ± 3.12 nm,PDI为0.16 ± 0.05,粒径分布范围窄。YZ-2多糖纳米乳多糖的含量经测定为11.6 mg/mL, 在室温下放置一个月并未出现浑浊、分层或破乳的现象,且继续保持着其原有的澄清透明状态,含量与粒径基本保持不变,稳定性较好。降血糖实验表明其能发挥出更好的降血糖活性,为今后多糖纳米乳剂的开发提供了参考基础。