含氟硅酸三钙骨水泥的固化性质及细胞毒性研究

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实验目的:用共沉淀法,制备含氟化钙(CaF2)的硅酸三钙(3CaO·SiO2,C3S)粉末,用其制备骨水泥,研究氟化钙掺杂对骨水泥固化时间、模拟体液浸泡pH值和显微结构的变化,评价该骨水泥的体外细胞毒性。实验方法:(1)用甘油-乙醇法测定样品中游离氧化钙(f-CaO)的含量;用吉尔摩(Gilmore)双针法测定含氟C3S骨水泥的固化时间;模拟体液(SBF)中浸泡后,测定浸泡液pH值随浸泡时间的变化,并结合SEM和XRD微观结构的观察,对骨水泥在模拟体液浸泡过程中晶相的动态变化进行描述。(2)用细胞培养法观察不同含氟量骨水泥的浸提液对L929细胞形态的影响,MTT试验评价含氟化钙骨水泥的体外细胞毒性。实验结果:(1)相同实验条件下,加入CaF2能有效降低C3S粉末中f-CaO的含量。(2)随着CaF2含量的增加,骨水泥固化时间延长,不含CaF2的C3S样品初凝时间为92min,终凝时间为149min,CaF2添加量为1.5wt%时,其初凝时间增加到141min,终凝时间为246min。(3)与C3S骨水泥相比,含CaF2的骨水泥在SBF中浸泡初期有较低的pH,随浸泡时间的延长,两种浸泡液的pH均下降,且趋于一致,pH值都接近中性;(4)XRD和SEM表明,骨水泥经过水化反应后可以生成C-S-H和CDHA,生成量与CaF2含量、固化液组成有关。(5)细胞培养24h时倒置相差显微镜下观察苯酚阳性对照组几乎无活细胞,多为悬浮、细胞核固缩的死亡细胞,阴性对照组及实验组细胞贴壁生长良好,多已充分伸展,呈梭形或不规则三角形,两组细胞数量、形态无明显差异;120h时实验组与阴性对照组细胞均生长旺盛,呈密集排列,两组细胞间隙显著减小。(6)细胞培养在添加含CaF2量为0wt%、0.6wt%和1.5wt%的C3S骨水泥不同浓度浸提液分别与阴性对照组相比,均无明显毒性。第3d时,CaF2量为1.5wt%的C3S骨水泥50%的浓度浸提液作用下,与阴性对照组相比,细胞增殖率有显著提高,第5d时,CaF2量为1.5wt%的C3S骨水泥75%和50%的浓度浸提液作用下,与阴性对照组相比,细胞增殖率有显著差异。实验结论:加入CaF2后制得的C3S中f-CaO少,纯度高;含CaF2的C3S骨水泥水化速度慢,固化时间延长;经过SBF浸泡后有C-S-H和CDHA生成,具有良好的生物活性;MTT试验表明含CaF2的C3S骨水泥没有细胞毒性,在一定浓度下可以刺激细胞增殖,可作为一种潜在的骨水泥修复材料。
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