第一部分：α1-抗胰蛋白酶活性测定方法及其影响因素 目的：研究用发色底物法测定α1-AT(α1-antitrypsin，α1-抗胰蛋白酶)生物活性时，以正常人混合血浆为参考标准的血浆稀释度范围和测定的影响因素。 方法：采用酶标仪测定抗胰蛋白酶与过量的胰蛋白酶反应后。剩余的胰蛋白酶与底物BAPNA(N<,α>-Benzoyl-DL-arginine 4-nitro anilide hydrochloride)发色反应的OD值(405nm)，观察时间和温度对反应的影响，优化正常人混合血浆(30人份)稀释度范围，建立并验证血浆标准曲线，同时观察几种物质对测定的影响。 结果：通过优化实验，血浆的稀释倍数在1/50到1/100之间有良好的线性；PEG4000、蔗糖、Tween80/TNBP(S/D)、辛酸钠等对活性测定无明显影响，而枸橼酸钠浓度>0.125mol/L以上时，α1-AT生物活性测定结果偏高约20％。 结论：以正常人混合血浆为参考标准品，用酶标仪测定α1-AT的生物活性，快速、准确，方法稳定可靠，α1-AT制备过程中常用的几种物质，除枸橼酸钠外，对其活性测定均无影响。 第二部分：α1-抗胰蛋白酶的分离纯化 目的：建立从低温乙醇法分离的血浆FⅣ-1沉淀中分离α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)的工艺，为规模化生产提供依据。 方法：1、聚合物沉淀：除去FⅣ-1溶解液中的大量杂蛋白；2、DEAE-SepHarose FF柱层析：进一步纯化得到纯度高α1-抗胰蛋白酶；3、用免疫单扩散、双缩脲(或Lowry)、发色底物、SDS-PAGE、Western-blot等方法，分析α1-抗胰蛋白酶的含量、蛋白总量、活性、纯度和特异性等。 结果：纯化样品分析的结果表明，α1-抗胰蛋白酶的比活性为0.7～0.8mg α1-AT/mg Protein，纯度大于90％(SDS-PAGE)，Western-blot鉴定主带为分子量52KD显色带(α1-抗胰蛋白酶)，总回收率大于60％。 结论：本研究描述的纯化工艺，可以从血浆FⅣ-1沉淀中分离纯化出高纯度的α1-抗胰蛋白酶，为规模化生产奠定了基础。 第三部分：α1-抗胰蛋白酶的病毒灭活 目的：研究辛酸钠在α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)病毒灭活中的应用，确定保护剂和灭活的条件，并对病毒灭活效果进行验证。初步研究有机溶剂/去污剂(磷酸三丁酯/吐温80，TNBP/Tween80，S/D)法和巴斯德消毒法(巴氏法)对α1-AT活性的影响。 方法：室温条件下，在α1-AT溶液中加入不同的保护剂，加入0.3％的辛酸钠，调节pH至5.38、5.50、5.60，室温孵育不同时间，取样，分别测定活性的变化；对选定的灭活条件，用辛德毕斯病毒(Sindbis virus)和伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)进行灭活验证。测定S/D法病毒灭活前后的α1-AT。活性变化；巴氏法灭活病毒时，加入不同的保护剂，测定不同保护剂条件下，灭活后α1-AT活性的变化。 结果：纯化的α1-AT样品加入40％蔗糖和2％白蛋白作为保护剂，加入0.3％辛酸钠，调pH5.60±0.02，1h内使Sindbis病毒和PRV各下降>5LgTCID<,50>，α1-AT活性1h内下降<10％。S/D灭活前后，α1-AT活性下降约5％左右；巴氏法用40％蔗糖和0.4mol/L柠檬酸钠作为保护剂，灭活前后α1-AT活性下降20％左右。 结论：辛酸钠可以作为α1-AT制剂的脂包膜病毒的灭活剂。