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本文对双Bt基因克隆与植物表达载体的构建进行了研究。主要内容及结果如下:
1、通过PCR技术,从pBin438中克隆出抗虫基因Bt1。测序结果显示,所克隆Bt1基因全长1836bp,与原基因序列(改造后的基因)100%同源。
2、通过PCR技术,从pBCC3中克隆出抗虫基因Bt3。测序结果显示所克隆Bt3基因全长1794bp,与NCBI所登陆的基因(基因登录号:M84650)100%同源。
3、通过DNA重组技术,将Bt1基因正向插入中间载体的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,构建成pCAMBIA1305-Bt1植物表达载体。
4、通过DNA重组技术,将Bt3基因正向插入中间载体的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,构建成pCAMBIA1305-Bt3植物表达载体。
5、采用PCR技术,从pCAMBIA1305-Bt3克隆出35S-Bt3-NOS基因片段。克隆后,将35S-Bt3-NOS正向插入pCAMBIA1305-Bt1中间载体的Sma Ⅰ和HindⅢ两酶切位点之间,构建成同时表达Bt1和Bt3的pCAMBIA1305-Bt1-Bt3植物表达载体。