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目的:动脉粥样硬化是一种炎症性疾病,内皮细胞损伤是动脉粥样硬化的始动环节,CXC趋化因子配体16(CXCL16)作为黏附分子、趋化因子及清道夫受体参与其中。我们的研究目的在于探索(1)炎性损伤因素脂多糖(LPS)是否影响内皮细胞CXCL16表达及其作用途径;(2)与炎症及动脉粥样硬化相关的miR-146a对LPS诱导的CXCL16表达的调控及作用机制。方法:采用体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),给予LPS炎性刺激,构建炎性细胞模型;通过生物信息学网站预测miR-146a作用靶点;通过脂质体转染miR-146a模拟体(miR-146a mimics)或miR-146a抑制剂(miR-146a inhibitors),过表达或抑制内皮细胞中miR-146a表达;通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)方法观察内皮细胞活性变化,免疫荧光观察细胞转染情况;采用分子生物学技术酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞上清液中CXCL16表达,蛋白印迹(Western blotting)检测细胞CXCL16及信号通路分子Toll样受体4(TLR4)、核转录因子κB(NF-κB)蛋白表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-146a表达水平。结果:(1)利用浓度梯度(0-10ug/mL)及时间梯度(0-48h)的LPS干预HUVECs,与空白对照组相比,在1、3、10ug/mL(24h)及6、12、24、48h(1ug/mL)内皮细胞活性明显降低(P<0.05);CXCL16在LPS浓度1ug/mL时释放及表达增加,时间越长,内皮细胞释放及表达CXCL16明显增加(P<0.05)。(2)利用LPS诱导HUVECs,检测信号通路TLR4、phosphor-NF-κB p65、NF-κB p65是否被激活。结果显示,TLR4、phosphor-NF-κB p65在1ug/mL LPS浓度下表达明显增加;在作用时间上,TLR4及phosphor-NF-κB p65均在24小时变化明显(P<0.05)。给予TLR4的抑制剂TAK-242(10uM,12h),阻断TLR4后,选择1ug/mL的LPS继续干预24小时,与空白组相比,TAK-242抑制剂组TLR4及下游NF-κB表达明显减少;并且TAK-242抑制剂组,细胞释放及表达CXCL16相较于空白组明显降低(P<0.05)。(3)利用LPS诱导HUVECs,检测miR-146a表达。与空白对照相比,LPS能够诱导miR-146a表达明显增加(P<0.05)。进一步,通过转染上调及下调miR-146a表达后,检测CXCL16的表达变化。结果显示,转染miR-146a mimics,上调miR-146a表达后,相较其对照组,CXCL16表达明显下降;相反的,转染miR-146a inhibitors,抑制miR-146a作用,CXCL16表达高于其对照组(P<0.05)。(4)通过转染上调及下调miR-146a后,检测TLR4及phosphor-NF-κB p65表达。结果显示,转染miR-146a mimics组,上调miR-146a表达后,TLR4、phosphor-NF-κB p65表达下降;相反,miR-146a inhibitors组在抑制miR-146a后,TLR4、phosphor-NF-κB p65表达增加。我们在给予TLR4的抑制剂TAK-242(10uM,12小时)基础上,同时转染miR-146a inhibitors,检测TLR4/NF-κB通路,及CXCL16的表达变化。结果显示抑制剂TAK-242明显阻断了miR-146a inhibitor干预后上清及细胞高表达的CXCL16,并且TLR4、phosphor-NF-κB p65通路蛋白有相同的趋势(P<0.05)。结论:(1)LPS能够诱导内皮细胞CXCL16释放及表达增加;(2)LPS通过TLR4/NF-κB信号通路调节HUVECs中CXCL16表达变化;(3)在LPS诱导下HUVECs中,miR-146a表达增加,通过作用于TLR4,负反馈调控CXCL16的表达。