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第一部分巨大肝细胞癌术后生存分析及nomogram预测模型的建立目的:手术仍是目前肝癌最有效的治疗手段,在肝细胞癌亚型中,我们选择预后差、复发率高的巨大肝癌病人(直径≥10 cm)进行临床病理资料分析,建立术前和术后nomogram预测模型对病人的生存和复发进行分析。方法:回顾性分析2008年1月到2009年12月在东方肝胆外科医院行肝切除术的464例巨大肝癌病人以及2008年1月到2010年4月的在福建医科大学附属第一医院行肝切除术的90例巨大肝癌病人的临床病理资料。观察术后围手术期并发症、死亡率、复发间隔时间和总生存期。将东方肝胆外科医院病人随机分为建模组和内部验证组,全部的福建医科大学附属第一医院病人为外部验证组,Cox回归分析对术前和术后资料分别进行单因素和多因素分析,将多因素有意义(P<0.05)的变量纳入最终的术前和术后nomogram预测模型中。通过C-index、校准曲线以及验证组验证该模型的预测性。结果:东方肝胆外科医院病人的术后并发症发病率为18.6%(n=95);术后1、3、5年累计复发率为43.8%,74.1%和82.1%;生存率为75.1%,49%和33.3%。福建医科大学附属第一医院病人的术后并发症发病率为30.5%(n=32);术后1、3、5年累计复发率为38.3%,69.2%和84.1%;生存率为77.7%,44.9%和21.5%。基于术前和术后资料预测生存的nomograms预测生存的C-index分别为0.75(95%CI,0.72-0.78)和0.78(0.75-0.81)。术后3年、5年生存的校准曲线nomograms预测的生存情况和实际生存情况有较高的吻合度。通过nomograms预测模型,将病人进行分层,将术后病人有效的分为生存率逐渐增加的四等分(P<0.01)。术前临床病理资料多因素分析表明:AFP>200ug/L、高HBV-DNA载量、多发肿瘤、较大的肿瘤直径,以及合并门脉癌栓为生存的独立危险因素;AFP>200ug/L、高HBV-DNA载量、多发肿瘤、较大的肿瘤直径以及合并门脉癌栓为复发的独立危险因素。术后临床病理资料多因素分析表明:高HBV-DNA载量、多发肿瘤、较大的肿瘤直径、有血管侵犯、肿瘤包膜不完整、较差的Edmonson-Stenier分级为生存的独立危险因素;高HBV-DNA载量、多发肿瘤、较大的肿瘤直径、有血管侵犯、肿瘤包膜不完整为复发的独立危险因素。结论:术前和术后nomogram预测模型对预测巨大肝癌术后病人的长期生存和复发情况有良好的准确性。第二部分巨大肝细胞癌根治术后复发相关的差异蛋白质组学研究目的通过同位素标记的定量蛋白质组学技术(i TRAQ)鉴定与筛选巨大肝细胞癌根治术后复发相关的差异表达蛋白。方法选取巨大肝细胞癌手术切除术后复发病人的初次手术新鲜肝癌组织标本,根据术后复发时间分组。应用i TRAQ试剂标记的二维液相色谱-串联质谱(2DLC-MS/MS)联用技术进行分析得到差异表达蛋白,并进一步行生物信息学分析。结果<6个月和>2年复发组比较之间存在显著表达差异(大于1.5倍或小于0.67倍)的蛋白质分子共计409种;6-12个月和>2年复发组比较之间存在显著表达差异的蛋白质分子共计518种。在本研究中,我们进一步筛选出随复发时间不同而变化较大的差异蛋白质10种,上调的有S100A9、MPO、APOA4、TMEM97、NR5A2,下调的有DHRS2、TTC4、CHD2、HPD、FTCD。GO分析显示,差异表达蛋白相关基因多参与类固醇代谢,氧化还原以及蛋白代谢。IPA分析显示,差异表达蛋白主要参与分别由NR5A2、IL1、ERK1/2、NFk B和IFNα调控的转录调控网络。结论iTRAQ标记的定量蛋白质组学技术从整体上了解肝细胞癌术后复发过程中蛋白质的表达差异,为筛选出有意义的生物标记物提供一个良好的平台。生物信息学的研究方法进一步了解差异表达蛋白的功能和以及其调控网络。第三部分巨大肝细胞癌根治术后复发的的差异蛋白表达验证目的从m RNA和蛋白水平对筛选的蛋白进行验证,筛选与肝细胞癌术后复发相关的差异蛋白。方法选取S100A9、DHRS2、TMEM97和NR5A2等四种蛋白进一步验证。不同复发时间巨大肝癌病人的新鲜肝癌组织标本进行荧光定量PCR(Q-PCR)、免疫印迹(Western blot)验证。不同复发时间巨大肝癌病人的肝癌石蜡切片标本行免疫组化验证。结果Q-PCR和Western blot验证结果显示,TMEM97高表达为术后复发的危险因素。免疫组化验证结果显示,TMEM97高表达(P=0.005,HR1.534)、术前高血清AFP(0.003,1.595)、肿瘤多发(0.000,2.422)、肿瘤直径较大(0.018,1.042)、有肉眼癌栓(0.002,1.776)、有MVI(0.019,1.504)、包膜不完整(0.004,0.595)、术中输血(0.028,1.590)为术后复发的独立危险因素。结论TMEM97在蛋白和m RNA水平的表达与蛋白组学结果一致,TMEM97可能作为肝细胞癌根治术后复发相关的预警蛋白。