长春碱纳米粒对大鼠C6脑神经胶质瘤的抑制作用研究

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目的:制备硫酸长春碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(VBL-PBCA-NP),对该纳米粒进行质量检测,研究该纳米粒对大鼠C6脑神经胶质瘤细胞的抑制作用,并对该纳米粒进行安全性检测。方法:①乳化聚合法制备VBL-PBCA-NP,透射电子显微镜观察其形态特征,马尔文粒度分析仪测定粒径及分布,紫外分光光度计法检测其包封率及载药量。②利用MTT法及生长曲线法对比测定VBL-PBCA-NP及VBL对大鼠C6脑神经胶质瘤细胞增殖抑制作用;利用克隆形成实验测定该纳米粒对单个细胞克隆形成能力的影响;通过HE染色及扫描电子显微镜分别观察VBL-PBCA-NP对细胞形态及细胞表面超显微结构的影响,并与VBL进行比较。通过流式细胞仪检测VBL-PBCA-NP及VBL对细胞周期及凋亡的影响。③MTT法比较检测VBL-PBCA-NP及VBL对原代培养星形胶质细胞的毒性;通过溶血性试验及急性毒性试验对该纳米粒进行安全性检测。结果:①制备的VBL-PBCA-NP平均粒径是74.4nm,包封率为78.47%,载药量为39.23%,纳米粒分布均匀,无粘连,粒径分布范围较窄。②MTT结果表明:VBL浓度在0.5~5000μg/L范围内,VBL-PBCA-NP能明显抑制大鼠C6脑神经胶质瘤细胞的生长增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。在相同的VBL浓度及培养条件下,VBL-PBCA-NP比VBL具有更强的抗肿瘤作用。VBL-PBCA-NP能显著抑制大鼠C6脑神经胶质瘤细胞的生长,与VBL组相比,VBL-PBCA-NP组的增长抑制率显著提高(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,VBL-PBCA-NP组的诱导凋亡作用明显强于VBL组,细胞大量停留在G2期,细胞分裂受阻。而克隆形成实验也表明:VBL-PBCA-NP作用后的神经胶质瘤细胞的分裂增值能力显著低于VBL组(P<0.05)。HE染色显示,同样的药物浓度作用下,VBL-PBCA-NP组更容易引起细胞数量减少,凋亡明显。扫描电子显微镜观察结果显示:VBL-PBCA-NP及VBL组均能引起大鼠C6神经胶质瘤细胞胞膜内折,形成凋亡小体。③VBL-PBCA-NP的半数致死量是26.377mg/Kg,95%的可信限=21.868-~33.249mg/Kg。VBL的半数致死量是22.7 mg/Kg,95%的可信限=18.815-~27.762mg/Kg。MTT实验显示,VBL-PBCA-NP比VBL对大鼠星形胶质细胞有着较低的细胞毒性作用,能够有效缓和长春碱药物注射造成的体重减轻及器官衰竭现象。结论:制备得到的VBL-PBCA-NP粒径分布均匀,无粘连,符合纳米药物的粒径标准。得到的纳米粒制剂比VBL对大鼠C6脑神经胶质瘤细胞有显著的增殖抑制性,影响细胞周期并引发细胞膜内折,形成凋亡小体。对原代培养的星形胶质细胞毒性较小,在急性毒性实验中也显示出较低的全身毒性。在特异靶向治疗肿瘤方面有很好的应用前景。该纳米粒不存在溶血性,可以作为静脉注射剂进行临床使用。
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