一株产谷胱甘肽啤酒酵母菌株的选育研究

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谷胱甘肽(glutathione)是自然界广泛存在的生物活性三肽,是L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸的缩合物。谷胱甘肽一般以还原形式存在于生物体内,故谷胱甘肽一般指的都是还原性谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)。GSH有多种重要生理功能,因此,它在临床治疗、食品、保健和体育等领域的应用非常广泛。从上世纪70年代开始,国外一些公司开始了提高GSH产量有关的研究并工业化生产GSH。虽然国内也开始了有关研究和工业化生产,但是由于国产GSH的产量和纯度远远不如国外产品,于是国外GSH产品垄断我国市场的局面始终没有改变。在这种背景下,本文对提高本实验室保藏的啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)的GSH产量进行了研究。首先,选择啤酒酵母(S.cerevisiae) KZY208-3为出发菌株,其GSH产量为32.1mg/l。对出发菌进行紫外线(UV)诱变,筛选紫外线突变株和抗氯化锌突变株。其中,KRZZ-13的产量提高较明显,其GSH产量为62.8mg/l,比出发菌提高了95.6%。以三氮唑和叠氮化钠作为抗性筛选药物,对稳定遗传的KRZZ-13用1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)处理,同时筛选三氮唑和叠氮化钠抗性突变株,最终获得了突变株KRN-41,其产量为69.7mg/l,产量提高率为117.1%。又通过紫外线和MNNG复合诱变,获得了GSH高产突变株KRZN-37,其产量为162.0mg/l、湿重为58.5g/l,产量比出发菌提高了404.7%。对KRZN-37进行的遗传稳定性试验说明,KRZN-37能稳定遗传。对KRZN-37进行了培养基组分和培养条件优化。通过单因素实验和正交设计实验,确定其最佳培养基组分为:蔗糖20g、牛肉浸膏15g、L-半胱氨酸2g、(NH4)2SO46g、NaCl2g、MgSO40.1g、K2HPO41.5g、KH2PO41.5g、蒸馏水1000ml,最佳培养条件为:发酵温度32℃、接种量15%、装液量30ml/250ml、发酵30h。在最佳培养条件下KRZN-37的GSH产量为173.2mg/l,湿重为53.3g/l、产量提高率为439.6%(5.4倍)。
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