高盐医药化工废水中优势功能菌的筛选及其耐盐分子机制研究

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目前,高盐有机废水的处理是国内外研究的难点和热点之一。近年来耐盐嗜盐菌及好氧反硝化菌等优势功能菌的成功分离纯化使得高盐废水的处理成为可能。由于耐盐嗜盐菌对高渗环境的适应机制尚不清楚,我们需要了解耐盐菌的耐盐机制,然后对菌株进行改造,以期获得高效处理高盐废水的菌株。本研究以江西沃邦兴环保科技有限公司污水处理厂活性污泥样品为研究对象,筛选出了三株具有较好COD、氨氮去除效果的优势功能菌株。本研究后期对筛选的耐盐酵母进行转录组学分析,研究该菌株具体的耐盐途径与机制,找出相关的耐盐基因。对该菌株进行紫外-常压室温等离子体诱变,以期获得更高耐盐的菌株。本研究结果如下:1、从江西沃邦兴环保科技有限公司污水处理厂活性污泥中筛选出一株高耐盐菌,通过形态学与分子生态学鉴定,该菌株为季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii),命名为W2,基因登录号为KX447139,将该菌株应用与污水处理,COD去除率可达到73%。2、通过BTB筛选培养基,从活性污泥中筛选得到一株好氧反硝化菌,通过形态学与分子生态学鉴定,该菌株为副球菌属(Paracouccus),命名为LX 1-3,基因登录号为MH156598。对该菌株进行反硝化性能测试,结果表明:该菌株与耐盐菌(KX447139)共同处理污水,在好氧条件下,以好氧反硝化菌与高效耐盐菌1:1的接菌量接入污水中,30℃反应48h后,氨氮去除率可高达86.36%。3、通过改良R2A(富集)培养基,从活性污泥中筛选得到了一株氨氮去除能力较强的菌株。对这株菌进行形态学和分子生物学鉴定,该菌株为油酸亚种菌属(Aquadcterium olei),命名为XTT,其基因登陆号为MH251870。对该菌的氨氮去除效能进行检测,结果表明:将该菌株与好氧反硝化菌共同处理污水,以硝化菌与反硝化菌以1:3比例接种,28℃摇床培养72h后,其氨氮去除率可高达95%。4、采用高通量测序技术对季也蒙毕赤酵母进行转录组测序。测序数据经过denovo拼接后得到8220个unigene,其中6334个基因在swissprot库中有注释信息。以无盐为参照,低盐胁迫下有1135个unigene差异表达,高盐胁迫下有1948个unigene差异表达。以低盐为参照,高盐胁迫下有3056个unigene差异表达。在KEGG代谢途径数据库注释到MAPK信号通路代谢途径与耐盐性相关,而参与MAPK信号通路的有51个unigene,其中6个基因显著差异表达。5、以季也蒙毕赤酵母W2为原材料,经过紫外诱变90s,常压室温等离子体诱变90s后得到一株高耐盐菌株W2U1C1,其耐盐度从18%提高到了22%。本文通过活性污泥筛选得到三株功能优势菌,通过废水处理优化后,COD去除率与氨氮去除率均大幅度提高;研究耐盐酵母的耐盐机制,解析其耐盐的相关途径与相关基因。这为以后高盐有机废水的处理提供了菌种选择。
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