血吸虫病作为全球性疾病对公众健康具有极大影响,遍及74个国家和地区,近250百万人受到血吸虫病的危害。血吸虫成虫作为复殖科吸虫寄居在作为宿主的哺乳动物、鸟类、以及鳄鱼的血管中,其生活史主要分为寄居于以水生生活的钉螺为中间宿主时期和以脊椎动物为终宿主时期。现在的研究显示,主要有六种血吸虫可感染人类,它们分别是曼氏血吸虫、日本血吸虫、湄公河血吸虫、间插血吸虫、埃及血吸虫和马来血吸虫。前四种血吸虫与慢性肝病有关,最初的分类方式是以血吸虫虫卵的形态学差异以及其中间宿主的区别为基础的。并殖吸虫病是一种长期以来被忽略的疾病,代表虫种为卫氏并殖吸虫,寄生于宿主肺部,导致肺型并殖吸虫病。在我国24个省、市、自治区均有并殖吸虫的病例报道。而斯氏狸殖吸虫是仅在我国发现的并殖吸虫虫种,人体感染后引起肺外型并殖吸虫病,即斯氏狸殖吸虫病。已有的资料显示在三峡水库兴修之前,三峡库区为斯氏狸殖吸虫病流行区,而非血吸虫病流行区。随着三峡水库的兴修对三峡库区的生态环境等造成的影响,使这一地区逐渐面临血吸虫病的威胁。而大量的研究显示,中国流行的主要为日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫,由于两种虫种均隶属于吸虫纲,复殖目,亲缘关系较近,具有相似的遗传背景,研究资料表明,日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫虫体以及虫卵蛋白之间存在大量同源性较高的蛋白,因此在血吸虫病和斯氏狸殖吸虫病的免疫诊断中,两种虫种之间的同源性抗原往往引起免疫诊断中的交叉反应,使免疫诊断不能及时正确鉴别两种吸虫的感染和疾病。在我们的课题中,我们试图从基因角度探讨日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫之间的遗传相似性,研究免疫诊断中出现的日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫之间出现交叉反应的遗传背景,同时从蛋白质组学角度,采用SDS-PAGE、2DE及Western blotting等方法寻找日本血吸虫区别于斯氏狸殖吸虫的特异诊断抗原。首先我们从基因的角度探讨了日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫在rDNA-ITS2序列和cox1序列之间的异同。利用生物信息学的方法,用MAGE4.0软件对日本血吸虫、斯氏狸殖吸虫以及其他的吸虫的遗传进化关系进行分析,建立遗传系统进化树,通过NJ法和MP法建立的遗传进化树是相同的。在对rDNA-ITS2序列的分析中,我们发现日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫之间有42.7%的相似性,进一步分析显示,一共有12种相同的转录因子结合位点。而对日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫的cox1部分序列的分析我们发现所本实验获得的这段cox1序列中所有的转录因子结合位点是相同的。这从基因水平上为日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫存在交叉抗原的可能性提供了理论依据。其次,我们从蛋白组学的角度根据SDS-PAGE、Western blotting二维电泳以及De Novo肽测序等技术对日本血吸虫成虫以及虫卵蛋白进行分析。利用Western blotting技术以日本血吸虫病患者血清、斯氏狸殖吸虫病患者血清以及健康人血清分别为一抗对日本血吸虫成虫和虫卵可溶性蛋白进行识别,以获得能被日本血吸虫病患者血清识别的特异抗原,再在此基础上对2DE、Western blotting呈现的特异蛋白点进行De Novo肽测序分析,并从而确定可用于诊断的日本血吸虫特异性免疫诊断抗原。本实验经De Novo肽测序分析后,经NCBI数据库的对比查找分别获得一个日本血吸虫成虫和一个虫卵的可溶性特异诊断抗原,并明确日本血吸虫蛋白SJCHGC00820和Actin 5C与日本血吸虫成虫可溶性特异性蛋白具有较高的匹配度,而Tubulin beta-2C蛋白和来自埃及血吸虫的Beat-tubulin蛋白与日本血吸虫虫卵可溶性特异蛋白具有较高的匹配度。SJCHGC00820蛋白、Actin 5C、Tubulin beta-2C以及Beat-tubulin都是作为膜蛋白或者驱动细胞移动的肌动蛋白组成成分。作为可溶性蛋白,其抗原决定簇在蛋白的纯化过程中不会破坏,因此可以作为日本血吸虫的特异性免疫诊断的候选抗原。综上所述,我们以rDNA-ITS2和cox1基因序列入手从基因角度探讨了存在于日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫之间由于虫种的亲缘关系产生的相似的遗传背景,因此在蛋白表达方面的相似性,从而进一步研究日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫中存在的交叉抗原现象。另外,我们从蛋白组学方面以日本血吸虫患者血清为一抗的western blotting反应辅以2DE、De Novo肽测序技术从日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原中获得了四种可作为日本血吸虫病特异诊断抗原的候选蛋白。这将对日本血吸虫病和斯氏狸殖吸虫病的临床免疫诊断提供帮助,并为日本血吸虫病的预防疫苗研究打下基础。