目的:失眠是医学临床常见的证候之一,虽然不属于危重疾病,但常可诱发或加重心脏心悸,胸痹,眩晕,中风等内科疾病。顽固性失眠患者不仅降低了工作、生活质量,同时也给患者造成严重的心理负担和精神痛苦[1]。双夏汤最早收载于《重订灵兰要览》,从中医治病理论基础上讲,双夏汤用药规律与天地阴阳盛衰的自然规律相符,同时也与人体中营卫循环的节律相合,且从临床实践角度讲,积累了大量丰富的临床经验。本研究旨在探索双夏汤不同配伍比例的化学成分变化,找寻总结差异,并利用药效学筛选模型对双夏汤治疗失眠症最佳配伍比例及双夏汤有效化学成分组进行筛选。方法:1、采用HPLC-UV法测定并比较双夏汤不同配伍比例中葫芦巴碱、尿嘧啶和腺苷煎出量差异。2、HPLC-UV法测定双夏汤不同配伍比例液相色谱图,从图中找出共有成分峰进行归属判断,比较共有成分峰差异。3、采用DAMS果蝇活动监测系统测定果蝇空白组、用药组睡眠时间,筛选比较出最佳给药时间及不同配比药效差异。4、采用HPLC-ECD法测定空白对照组,睡眠剥夺组及相应用药组中果蝇脑部5-HT、DA和NE、HVA含量,根据各单胺类神经递质含量增减对映药效结果,筛选出双夏汤最佳配比。结果:1、半夏配伍夏枯草,促进尿嘧啶、腺苷煎出,降低葫芦巴碱煎出量。2、采用高效液相色谱法测定了不同配伍比例双夏汤液相色谱图,并得到12个化学共有成分峰,与半夏、夏枯草原药材液相色谱图比较得到,共有峰中3、4、10、1 1为半夏所属,8、9为夏枯草所属,其余为两者共有,经比较共有峰3、4、8、9、10、11各配比的含量,发现随着夏枯草的比例的增加,各峰成分含量逐步增加。3、通过DAMS果蝇活动监测系统测定果蝇睡眠时长,研究了双夏汤不同配伍比例对果蝇睡眠行为学的影响,得出了最佳用药培养时间为3天,延长果蝇睡眠的最佳配比组为半夏夏枯草1:1。4、将果蝇分组为空白对照组、睡眠剥夺组、用药组及睡眠剥夺用药组,测定果蝇头部中5-HT、DA、NE及HVA含量,通过比较不同神经递质的含量增减,得出双夏汤对果蝇生物模型促进睡眠的最佳配比为半夏:夏枯草=1:1。结论:考虑到腺苷、尿嘧啶、葫芦巴碱对于治疗睡眠作用的影响,半夏夏枯草不同配比含量测定结果显示其合煎效果比单煎效果更佳。不同配比双夏汤的液相色谱图比较得出,部分成分含量随夏枯草比例增加而增加,夏枯草鲜有治疗失眠功效报道,故推论夏枯草在双夏汤配伍比例中存在最大剂量和最佳剂量。果蝇睡眠活动监测及头部单胺类神经递质测定结果显示,双夏汤促进果蝇睡眠最佳的用药比例为半夏:夏枯草=1:1。本实验未能找到能明显体现最佳药材配比差异的化学成分,成为后期继续研究的重点。但本实验从化学物质基础和药效学筛选两个层面验证了双夏汤中半夏:夏枯草1:1配伍的合理性,与临床应用相吻合,为研究类似中药复方物质基础及作用机理提供了指导借鉴意义。