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多不饱和脂肪酸(PUFAs)是一类被广泛研究和关注的脂肪酸。PUFAs主要包括ω-6和ω-3 PUFAs两种类型,ω-6PUFAs对人体意义不大,其过量的摄入反而会危害人体健康。而ω-3PUFAs对人体却具有积极的意义,已被证实在预防和治疗心血管疾病、关节炎、癌症等多种疾病方面发挥着重要作用。但自然界中ω-6PUFAs含量丰富而ω-3PUFAs含量极少,导致人体中ω-6PUFAs摄入过多而ω-3PUFAs摄入严重不足,使人体中ω-6/ω-3之比高达16以上。因此,如何使人体增加ω-3PUFAs的摄入量就成了合理利用脂肪酸的关键,也是当今世界人们所关心的一个问题。体细胞核移植技术与基因转移技术相结合为生产转基因家畜开辟了一条有效途径,为体外生产更多的ω-3PUFAs提供了新的契机。本研究旨在提高转基因体细胞克隆猪的生产效率,研究了体细胞克隆猪胚胎移植过程中的最佳运输温度、时间及胚胎移植的最佳时机,同时对富含ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆猪的微卫星及脂肪酸进行了检测。为提高转基因克隆猪效率,研究了不同运输温度与时间对猪孤雌胚胎发育的影响,以确立猪克隆胚胎的最佳运输温度与时间。试验包括:(1)不同温度(37℃、38℃、39℃)对孤雌胚胎的卵裂率、囊胚率的影响;(2)不同时间(2 h、3 h、4 h)对孤雌胚胎的卵裂率、囊胚率的影响。实验结果:(1)培养3h后,在39℃运输时,孤雌胚胎的卵裂率(90.0±4.3%)和囊胚率(33.8±7.4%),与37℃、38℃的卵裂率(72.6±60.9%、80.6±5.5%)和囊胚率(18.9±1.5%、26.0±2.2%)相比,差异显著(P＜0.05);(2)培养3h后,孤雌胚胎的卵裂率(81.6±6.1%)和囊胚率(31.2±3.6%),与培养2h、4h的卵裂率(64.9±9.6%、49.2±2.4%)和囊胚率(18.2±6.7%、19.7±2.9%)相比,差异显著(P＜0.05)。为提高猪体细胞克隆胚胎移植效率,比较了供受体同期化方案对猪体细胞克隆胚胎输卵管内移植后30 d妊娠率和妊娠足月率的影响。将体外培养2d的猪体细胞克隆胚胎,移植到发情第1～2 d的受体母猪。根据受体母猪卵泡发育与排卵状况将受体猪群分为2个类别:卵泡发育处于即将排卵或正在排卵阶段(组一);卵泡发育处于排卵前阶段或完全排卵阶段(组二)。结果发现:(1)组一6头受体母猪胚胎移植后30 d受胎率为100%;而组二10头受体母猪受胎率为40%,二者差异显著(P＜0.05)。(2)组一6头受体母猪全部产仔,妊娠足月率为100%;组二10头受胎母猪2头产仔,妊娠足月率为20%,二者差异显著(P＜0.05)。本研究首次通过体细胞核移植生产了转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1猪。出生的21只仔猪,存活15头,经微卫星、PCR和Southern blot鉴定,最终获得13只转基因猪。在转基因猪肌肉组织中DHA平均含量高达0.968%,ω-3PUFAs总含量平均高达7.523%。这表明本研究sFat-1基因能够在转基因大型家畜中产生更多、更长链的、且更有价值的DHA。以上结果表明:(1)在39℃、3h内进行孤雌胚胎的运输,能获得较高的卵裂率、囊胚率;(2)体外培养2d的猪体细胞克隆胚胎发育阶段与即将排卵或正在排卵的受体母猪的子宫环境同期性最好,得到了理想的胚胎移植效率。(3)sFat-1基因能够在转基因大型家畜中产生更多、更长链的、且更有价值的DHA。