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目的:大多数T细胞肿瘤表面有TCR独特型抗原,可作为肿瘤特异性抗原用于免疫治疗。应用TCR独特型DNA疫苗有可能激发抗肿瘤独特型免疫反应。本文观察TCR独特型DNA疫苗诱导BALB/C小鼠抗肿瘤免疫反应的情况。 方法:本文采用RT——PCR的方法扩增JurkatT淋巴瘤细胞特异性重排的TCRγ可变区基因片段,克隆到真表达载体pcDNA3中,经序列测定无误后,碱裂解法大量提取质粒,制备DNA疫苗。选用24只BALB/C小鼠,分三组进行免疫:(1)pcDNA3组:每次注射pcDNA3100μg;(2)pcDNA3/TCRγ组:每次注射扣02丫体k叫八【义7,’卜。【(”y渊叭S型*A疫茵诱导特异性免疫反口的实验盼劳pc***}**R Y]00卜g;臼)pc**。’**R Y一L一2组:每次往 月****/**RY100卜9及人重组1*一2 5以g。采用肌肉注自力法免疫小鼠,每两周兔疫一次,共三次。间接免疫荧光法检测小鼠血清中抗体生成情况,应用 SPSS刀统计分析软件,将三纠小鼠血清抗体滴度取对数行LS*一t检验。RT一P*R it检测重组质粒在小鼠肌肉中的mRNA表达。 结果:本文构建了 Jurkat淋巳媲细胞系独特型 TCR v VI DNA重组载体 pCDNA。1CR Y。其寻达序列长 333hp。对序列进行蛋白抗原性分析发现其中包括 3个抗原决定族。用 TCR Y VI独特型DNA重组载体作为疫苗免疫小鼠,结果表明 pCDNA3汀CR Y组及PCDNA3厅CR Y—IL—2组小鼠1血肩中全部产生了特异性抗独特ffo抗体,抗体滴度在第4周开始增高,第6周时达到高峰。在同一取血时间,W**儿1*RY一几一二 组小鼠抗体滴度均高于pCDNA3/TCR Y组(P < 0*1)。pCD*A3/TCR Y组小鼠抗体滴度最高达1:16小pc***。汀*R丫一1*一2组小鼠抗体的滴度最高达1:640。在 pCDNA3/TCR Y组及 pCDNA3/TCR Y一IL一2组小鼠中用RT——PCR iL均检测到了重组质粒在肌肉中的mRNA表达。 结论:1、成功构建JU水扯细胞系**R。独特型**A重组质 勺I以,I”卜、。卜>什。【<T一Hb引}V猢9#型0M疫苗诱导桔异性免疫反应的实验研究粒pcDNA31CRH 其表达序列长333hp,对序列进行蛋白抗原性分祈友现其中共包括3个抗原决定簇。 2、首次证实人工制备的TCR;表达载体作为TCR独特型DNA疫苗可以诱导小鼠产生特异性抗淋巴瘤细胞独特型抗体。 3、应用IL上免疫佐剂可使TCR。独特型DNA疫苗诱导的抗体滴度明显增高。