疏通三焦、清热利湿方对IgA肾病大鼠肾组织TGF-β1及血清IL-6、IL-17的影响

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ahqmchy
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目的:IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是一组以IgA为主的免疫复合物在肾小球系膜区沉积为特征、临床和病理表现多样化的原发性肾小球疾病。目前西医学对此尚无理想的医治方法,而近年来,中医药对IgAN的治疗疗效获得肯定。本实验通过制备IgAN大鼠模型,观察疏通三焦、清热利湿方对IgAN大鼠肾组织转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)及血清中白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-17(Interleukin-17,IL-17)表达水平的影响,探讨疏通三焦、清热利湿方治疗IgAN大鼠的可能作用机制,为临床治疗IgAN提供实验理论依据。方法:将40只体重在150180g的健康雄性清洁级SD大鼠,适应性饲养1周,检测尿蛋白阴性,然后随机分为4组,即正常组(N组)、模型组(M组)、贝那普利组(X组)与中药组(Z组),每组各10只。运用张静[1]等人制备IgAN大鼠模型的方法,即采用牛血清白蛋白(BSA)、脂多糖(LPS)、四氯化碳(CCL4)+蓖麻油的复合方法进行造模,造模完成后根据分组,分别给予相应药物干预。并于实验第2周、6周、11周、15周、19周始收集大鼠24小时尿液,以检测24小时尿蛋白定量(24hours urinary total protein,24h-UTP)。于实验第19周始,将大鼠禁食水12小时,称体重,用水合氯醛进行麻醉,于股动脉取血,离心,以检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)的含量。留取肾组织,进行HE、Masson、PASM染色,用免疫荧光法检测以IgA为主的免疫复合物在大鼠肾组织中的沉积情况,应用免疫组化法及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察TGF-β1在肾组织中的表达情况,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-6、IL-17在实验大鼠血清中的含量。结果:1 24h-UTP比较造模前,N、M、X、Z组实验大鼠尿蛋白均为阴性,各组间相比无显著性差异(P>0.05);开始造模之后,与N组相比,M、X、Z组实验大鼠24h-UTP均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而M、X、Z各组实验大鼠间24h-UTP相比变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05);分别应用盐酸贝那普利与疏通三焦、清热利湿中药治疗后,M、X、Z组实验大鼠24h-UTP与N组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而X、Z组实验大鼠24h-UTP与M组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),X、Z组实验大鼠间24h-UTP比较无统计学差异(P>0.05)。2各组实验大鼠血清Scr、BUN、ALB含量比较N、M、X、Z组实验大鼠血清Scr、BUN、ALB含量相比,均无显著性差异(P>0.05)。3肾脏组织病理学观察3.1光学显微镜观察N组实验大鼠肾小球结构完整,肾小球系膜以及基质未见明显异常改变;M组实验大鼠肾组织可见明显的肾小球系膜细胞增生、系膜基质增多;X、Z组实验大鼠亦可见肾小球系膜细胞增生、系膜基质增多,但与M组比较,病理改变较轻。3.2免疫荧光观察N组实验大鼠肾小球系膜区未见免疫复合物沉积;M组实验大鼠可见团块状荧光绿色免疫复合物沉积于肾小球系膜区;X、Z组实验大鼠肾小球系膜区也有免疫复合物不同程度的沉积,但与M组相比,沉积量明显较少。4免疫组化法、RT-PCR分别观察TGF-β1在肾组织中的表达4.1免疫组化法观察TGF-β1在肾组织中的表达与N组相比较,M、X、Z组肾组织中TGF-β1表达明显升高(P<0.05);与M组相比较,X、Z组中TGF-β1表达降低(P<0.05);X组与Z组相比,两组实验大鼠肾组织中TGF-β1表达无显著性差异(P>0.05)。4.2 RT-PCR观察TGF-β1mRNA在肾组织中的表达与N组相比较,M、X、Z组实验大鼠肾组织中TGF-β1mRNA表达明显升高(P<0.05);与M组相比较,X、Z组实验大鼠肾组织中TGF-β1mRNA表达降低(P<0.05);X组与Z组相比,两组实验大鼠肾组织中TGF-β1mRNA表达无显著性差异(P>0.05)。5 ELISA法检测IL-6、IL-17在大鼠血清中的含量与N组相比较,M、X、Z组大鼠血清中IL-6、IL-17含量均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与M组相比较,X、Z组中IL-6、IL-17含量下降,差异有统计学意义(P<0.05);而X组与Z组相比,两组实验大鼠血清中IL-6、IL-17含量相差不大,无显著性差异(P>0.05)。结论:1疏通三焦、清热利湿方能明显减少IgAN大鼠24h-UTP,并且与盐酸贝那普利相比,疗效相当。2疏通三焦、清热利湿方可以减轻IgAN肾脏组织病理损伤情况,延缓IgAN的进一步发展。3疏通三焦、清热利湿方延缓IgAN进展的机制可能与降低TGF-β1在肾组织中的表达,减少IL-6、IL-17在Ig AN血清中的含量有密切关系。
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