【摘 要】
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目的:从内质网应激和Wnt/β-catenin通路角度探讨绞股蓝皂苷对成骨细胞的增殖分化作用。方法:1.选择出生24小时的SD大鼠3只,脱臼处死后提取并培养、传代和鉴定成骨细胞。2.取第四代(P4)的大鼠成骨细胞,配制不同浓度的含绞股蓝皂苷培养基并进行细胞培养,采用CCK-8法测定不同药物梯度浓度干预下成骨细胞增殖能力变化情况。3.采用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase acti
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目的:从内质网应激和Wnt/β-catenin通路角度探讨绞股蓝皂苷对成骨细胞的增殖分化作用。方法:1.选择出生24小时的SD大鼠3只,脱臼处死后提取并培养、传代和鉴定成骨细胞。2.取第四代(P4)的大鼠成骨细胞,配制不同浓度的含绞股蓝皂苷培养基并进行细胞培养,采用CCK-8法测定不同药物梯度浓度干预下成骨细胞增殖能力变化情况。3.采用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase activity,ALP)染色法测定不同药物梯度浓度干预下成骨细胞(P4)的成骨分化能力,从不同阶段检测绞股蓝皂苷对成骨细胞分化的影响。4.将成骨细胞分为对照组和实验组,根据CCK-8和ALP染色结果选择最佳的药物浓度,对照组用普通的完全培养基进行培养,实验组用含合适浓度的绞股蓝皂苷完全培养基进行培养,采用 qRT-PCR 检测 Wnt2、β-catenin、BMP2、GRP78/BIP、CHOP、PDI 的 mRNA 的表达,Western blot 检测 Wnt2、β-catenin、BMP2、GRP78/BIP、CHOP、PDI 蛋白的表达。结果:1.不同药物浓度培养基干预下成骨细胞增殖速率亦不同,其中当药物浓度为80 μg/ml、干预时间为5天时,增殖速率最高。2.当药物浓度为80 μ g/ml时成骨细胞ALP染色阳性率高于其他组别。3.与对照组相比,实验组中Wnt2、β-catenin、GRP78/BIP、PDI的mRNA出现了上调且具有统计学意义(P<0.05),CHOP的基因表达也有增加但没有统计学意义(P>0.05),而BMP2表达下降,差异没有统计学意义(P>0.05)。4.与对照组相比,实验组中的蛋白Wnt2、β-catenin、BMP2、PDI表达上升,差异具有统计学意义(P<0.05),CHOP表达有所增加,GRP78/BIP表达下降,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:1.绞股蓝皂苷能促进成骨细胞的增殖及成骨分化。2.绞股蓝皂苷可调节成骨细胞内的Wnt/β-catenin信号通路,促进分子伴侣的表达,有助于提高内质网正确折叠蛋白的速率,具有调节内质网应激的潜能。
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