维药神香草总黄酮对哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响及其作用机制研究

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目的:维药神香草总黄酮的大孔吸附树脂纯化工艺,使其含量达到50%以上;在哮喘大鼠模型的基础上,观察神香草总黄酮对哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响,并探讨其可能的作用机制,从而为神香草的开发利用提供理论依据。方法:(1)通过静态吸附-洗脱试验,以总黄酮的吸附量和解吸量为指标,比较11种不同型号大孔树脂对神香草总黄酮的吸附和解吸性能,筛选最佳大孔树脂型号;采用单因素试验考察上样浓度、上样流速、树脂径高比、洗脱剂百分比浓度及用量、洗脱流速等因素对最佳大孔树脂的纯化工艺的影响。(2)采用卵白蛋白(OVA)注射雾化吸入法复制哮喘大鼠模型的基础上,进行药物干预,通过BUXCO动物肺功能测定仪观察其对哮喘大鼠气道高反应性的影响;结合肺组织病理学的HE染色、Masson三色染色,观察气道炎症和气道重塑;计数各组大鼠BALF中的白细胞分类及EOS个数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠肺组织及BALF中TGF-β1、嗜酸性粒细胞活化趋化因子(Eotaxin-1)水平、血清中免疫球蛋白E(IgE)及肺组织中Ⅲ型胶原、转化生长因子β(TGF-β1)的含量;采用TBA法测定MDA含量;用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力。结果: (1)AB-8型大孔树脂最适合用于神香草总黄酮的纯化,其最佳纯化工艺参数为上样浓度为2.56mg/mL,上样流速为4BV/h,树脂径高比为1:5;吸附后先用5BV水洗涤树脂,洗脱流速为5BV/h,水洗脱液弃去,用百分比浓度为70%的乙醇/洗脱9BV,流速为4BV/h,收集洗脱液,浓缩,干燥,即得神香草总黄酮。此最佳纯化工艺使神香草总黄酮纯度达65.7%。(2)肺功能实验中模型组呼吸频率(F)相对于正常组显著增高(P<0.01),每分种通气量(MVb)、吸气流量峰值(PIFb)、呼气流量峰值(PEFb)显著减小(P<0.05或P<0.01),吸气时间(Ti)、呼气时间(Te)没有显著性差异(P>0.05);与模型组比较,神香草总黄酮中、高剂量组及地塞米松组可降低哮喘大鼠F(P<0.05或P<0.01),升高MVB、PIFB和PEFB(P<0.05),但对Ti、Te没有显著影响(P>0.05);与模型组相比,神香草总黄酮各剂量组大鼠BALF中细胞总数、Ly、Eos、Neu的百分比,血清IgE及肺组织Eotaxin含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);高、中剂量组能够改善气道炎症;与模型组相比,神香草总黄酮各剂量组大鼠肺组织Ⅲ型胶原(ColⅢ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);高、中剂量组能够改善或减缓气道重塑;结果表明,神香草总黄酮不同剂量均增高MDA、SOD含量,差异具有统计学意义(P<0.01),并呈剂量依赖性。结论:本研究优选的维药神香草总黄酮的AB-8大孔吸附树脂纯化工艺稳定、可行,符合中药5类新药研制要求。神香草总黄酮能够改善气道高反应性、大鼠肺功能,抑制气道炎症,减缓气道重塑,其作用机制可能抑制EOS等炎性细胞浸润及降低哮喘大鼠Eotaxin-1、IgE、TGF-β1、ColⅢ水平等有关。另外,神香草总黄酮可能通过清除氧自由基,减少气道炎症和氧化应激,从而改善或减缓气道重塑的发生。
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