论文部分内容阅读
目的:维药神香草总黄酮的大孔吸附树脂纯化工艺,使其含量达到50%以上;在哮喘大鼠模型的基础上,观察神香草总黄酮对哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响,并探讨其可能的作用机制,从而为神香草的开发利用提供理论依据。方法:(1)通过静态吸附-洗脱试验,以总黄酮的吸附量和解吸量为指标,比较11种不同型号大孔树脂对神香草总黄酮的吸附和解吸性能,筛选最佳大孔树脂型号;采用单因素试验考察上样浓度、上样流速、树脂径高比、洗脱剂百分比浓度及用量、洗脱流速等因素对最佳大孔树脂的纯化工艺的影响。(2)采用卵白蛋白(OVA)注射雾化吸入法复制哮喘大鼠模型的基础上,进行药物干预,通过BUXCO动物肺功能测定仪观察其对哮喘大鼠气道高反应性的影响;结合肺组织病理学的HE染色、Masson三色染色,观察气道炎症和气道重塑;计数各组大鼠BALF中的白细胞分类及EOS个数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠肺组织及BALF中TGF-β1、嗜酸性粒细胞活化趋化因子(Eotaxin-1)水平、血清中免疫球蛋白E(IgE)及肺组织中Ⅲ型胶原、转化生长因子β(TGF-β1)的含量;采用TBA法测定MDA含量;用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力。结果: (1)AB-8型大孔树脂最适合用于神香草总黄酮的纯化,其最佳纯化工艺参数为上样浓度为2.56mg/mL,上样流速为4BV/h,树脂径高比为1:5;吸附后先用5BV水洗涤树脂,洗脱流速为5BV/h,水洗脱液弃去,用百分比浓度为70%的乙醇/洗脱9BV,流速为4BV/h,收集洗脱液,浓缩,干燥,即得神香草总黄酮。此最佳纯化工艺使神香草总黄酮纯度达65.7%。(2)肺功能实验中模型组呼吸频率(F)相对于正常组显著增高(P<0.01),每分种通气量(MVb)、吸气流量峰值(PIFb)、呼气流量峰值(PEFb)显著减小(P<0.05或P<0.01),吸气时间(Ti)、呼气时间(Te)没有显著性差异(P>0.05);与模型组比较,神香草总黄酮中、高剂量组及地塞米松组可降低哮喘大鼠F(P<0.05或P<0.01),升高MVB、PIFB和PEFB(P<0.05),但对Ti、Te没有显著影响(P>0.05);与模型组相比,神香草总黄酮各剂量组大鼠BALF中细胞总数、Ly、Eos、Neu的百分比,血清IgE及肺组织Eotaxin含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);高、中剂量组能够改善气道炎症;与模型组相比,神香草总黄酮各剂量组大鼠肺组织Ⅲ型胶原(ColⅢ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);高、中剂量组能够改善或减缓气道重塑;结果表明,神香草总黄酮不同剂量均增高MDA、SOD含量,差异具有统计学意义(P<0.01),并呈剂量依赖性。结论:本研究优选的维药神香草总黄酮的AB-8大孔吸附树脂纯化工艺稳定、可行,符合中药5类新药研制要求。神香草总黄酮能够改善气道高反应性、大鼠肺功能,抑制气道炎症,减缓气道重塑,其作用机制可能抑制EOS等炎性细胞浸润及降低哮喘大鼠Eotaxin-1、IgE、TGF-β1、ColⅢ水平等有关。另外,神香草总黄酮可能通过清除氧自由基,减少气道炎症和氧化应激,从而改善或减缓气道重塑的发生。