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目的:病毒巨噬细胞炎症蛋白II(v MIP-II)是由卡波氏肉瘤疱疹病毒(KSHV)K4基因编码的一种人趋化因子同源蛋白。载脂蛋白B m RNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)是具有抗HIV-1功能的天然免疫因子。已有研究报道和本课题组前期研究显示v MIP-II可上调APOBEC3G的表达,但其表达调控机制及信号通路尚不清楚。本研究在明确v MIP-II上调APOBEC3G的基础上,进一步探讨v MIP-II激活APOBEC3G表达的信号通路及调控其表达的关键启动子作用区域。方法:通过脂质体转染方法将构建好的pEGFP-N3-K4真核表达载体转染入293T细胞中,以转染空载体p EGFP-N3细胞组为对照,Western blot技术检测转染p EGFP-N3-K4质粒细胞中v MIP-II的表达情况。采用定量PCR和Western blot技术分析v MIP-II对APOBEC3G以及趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6表达的影响。比较IFN-a与v MIP-II在诱导细胞中APOBEC3G表达水平的差异。检测AG490(JAK/STAT信号通路抑制剂)和U0126(ERK信号通路抑制剂)对细胞中APOBEC3G及JAK/STAT与ERK信号通路下游关键因子及其磷酸化表达水平影响,分析这些信号通路在v MIP-II激活细胞APOBEC3G表达中的作用。应用双荧光素酶报告基因检测系统分析v MIP-II调控APOBEC3G转录活性的关键启动子作用区域。结果:1.v MIP-II使APOBEC3G的m RNA和蛋白表达水平分别上调了2.6和1.7倍,1000IU IFN-α使空载体转染细胞组APOBEC3G的m RNA和蛋白表达分别上调1.8和2.0倍。统计学分析显示v MIP-II上调APOBEC3G的功能显著高于1000IU IFN-α(P<0.05)。2.v MIP-II上调趋化因子受体CCR3、CCR5和CCR6的m RNA水平,CCR3及CCR6的蛋白表达水平,并上调ERK1/2、STAT1、STAT2、STAT3的蛋白和磷酸化水平。AG490抑制了p EGFP-N3-K4转染细胞中STAT1的表达水平和STAT2、STAT3及两者磷酸化表达水平;U0126抑制作用不显著。3.报告基因检测结果显示,p EGFP-N3-K4质粒转染组APOBEC3G启动子活性明显强于空质粒组,其启动子活性在翻译起始位点上游720bp处开始大幅度下降且再无增强。结论:1.真核表达载体p EGFP-N3-K4能在293T细胞中表达v MIP-II蛋白,且可上调APOBEC3G表达。2.JAK/STAT信号通路在v MIP-II调控细胞内APOBEC3G表达机制中发挥着重要作用。3.v MIP-II在转录水平上明显激活了APOBEC3G的启动子活性,其关键转录元件区域位于APOBEC3G翻译起始位点上游720bp到480bp之间(-720/-480)。