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鲎试剂在医学检验领域扮演着极其重要的角色,以采血鲎为原料生产的鲎试剂的需求量越来越大,随着中国鲎种群数量的下降,致使我国的鲎试剂产业受到原材料的限制,如何满足鲎资源需求量,又能实现对鲎资源的保护成为一个关键问题。故本研究主要探讨不同外源因子对中国鲎成鲎免疫机能和血淋巴生化指标的影响,旨在加强采血鲎血淋巴细胞的快速恢复,进而达到对鲎资源的保护和可持续利用的目的。1.因此,为了研究饲料铜添加对中国鲎免疫机能及血液生化指标的影响,我们进行了为期28天的室内养殖实验,探究在半成品饲料中添加不同水平氨基酸鳌合铜(0、50、100 mg kg-1氨基酸螯合铜)对中国鲎非特异性免疫酶活性和血液生化指标的影响。实验结果表明,铜添加组成鲎血浆的抗氧化酶指标铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、总抗氧化能力(T-AOC)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)活性随实验时间的推移而呈升高趋势,而丙二醛(MDA)活性则相反,呈下降趋势。铜添加组血液生化指标甘油三酯(TG)和胆固醇(CHO)含量随时间推移呈下降趋势,但血蓝蛋白浓度(HC)则呈上升趋势。且在实验结束时,铜添加组所有抗氧化酶指标均显著升高,且高铜组(100 mg kg-1)、低铜组(50mg kg-1)的SOD、CAT、GPX、LZM和HC间无显著性差异,低铜组的T-AOC活性达最高值,MDA含量达最低值,高铜组的AKP、ACP活性达最大值,但CHO、TG含量呈降低趋势。以上结果表明,饲料中添加氨基酸螯合铜可提高中国鲎的免疫性能,但不同铜添加量引起机体的免疫功效强弱有明显不同。2.为了比较研究三种免疫增强剂对中国鲎血淋巴的免疫响应,我们向中国鲎体内注射不同剂量的β-葡聚糖(G)、肽聚糖(P)和角鲨烯(S)3种免疫增强剂,比较注射后0,6,12,24,48h后中国鲎的血淋巴细胞总数、活性氧含量及非特异性免疫酶活性变化。结果显示,与对照组相比,注射5mg/kg和10mg/kg的β-葡聚糖(G)、肽聚糖(P)、角鲨烯(S)组鲎的血淋巴细胞总数(THC)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)活性在实验期间均有升高趋势,丙二醛(MDA)活性有下降趋势,而HC在整个实验过程中则无明显变化。在48h时,注射低剂量组(5mg/kg)和高剂量组(10mg/kg)免疫增强剂中,在测定的血淋巴参数THC、ROS、LZM、AKP中,注射P均有最大值,而低剂量下的G、S与对照组相比无显著性差异,高剂量下G、S的ROS、LZM、AKP间无显著差异,但两者间的AKP显著高于对照组。在测定的SOD、CAT、T-AOC中,高、低剂量条件下均显著高于对照组,低剂量组G的SOD有最大值,高剂量G、S的SOD显著高于对照组,两剂量条件下注射G、P、S的CAT、T-AOC间无显著差异,均显著高于对照组。且在48h时,注射三种免疫增强剂间的MDA无显著性差异,但均显著低于对照组。以上结果表明,实验结束时注射3种免疫增强剂均能提高提高中国鲎的血淋巴参数,注射P中多种酶活性达到最大值,而注射G、S的大多数血淋巴参数间无显著差异,由此可推测出,这三种免疫增强剂进行对比,可将肽聚糖开发为中国鲎的免疫增强剂。3.为了研究N-乙酰半胱氨酸和灭活鳗弧菌对中国鲎血淋巴细胞参数的影响,我们向中国鲎体内注射N-乙酰半胱氨酸(NAC)和灭活鳗弧菌(V),比较注射后0,6,12,24,48h后中国鲎的血淋巴细胞总数、活性氧含量及非特异性免疫酶活性变化。结果表明,与对照组相比,注射NAC后中国鲎的血淋巴细胞总数(THC)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)活性在实验期间均有下降趋势,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)活性均有升高趋势。NAC与不同浓度V共同刺激下,中国鲎的THC、ROS、MDA含量相对仅注射NAC的下降趋势有所减缓,其它酶活性相对有所升高。而HC在整个实验过程中则无明显变化。在6-48h时,注射NAC组的THC、ROS均有最小值,NAC与V共同刺激下的SOD活性均显著高于其它组。48h时,NAC、V及共刺激下的CAT、T-AOC组间无显著差异,但均显著高与对照组。NAC+106V的MDA含量在48h最低,AKP活性在12-48h期间均最高,而NAC组的LZM活性在48h最高。以上结果表明,注射NAC可降低中国鲎的THC、ROS,NAC与V共刺激可缓和该下降趋势,灭活鳗弧菌组THC、ROS升高,也均可提高其余血淋巴参数,由此可推测ROS含量对中国鲎血淋巴细胞增殖及再生起着重要作用,从而提高其免疫机能。