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研究目的:以免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)患者及正常对照者(Normal control,NC)来源的骨髓间充质细胞(Bone marrow mesenchymal cells,BMCs)作为研究对象,构建巨核细胞体外分化模型及骨髓间充质细胞-巨核细胞体外共培养模型,旨在研究ITP患者来源的BMCs在体外生存、增殖和细胞因子表达等方面有无异常,以及对于巨核细胞分化及凋亡等生物学行为的影响,从而了解在ITP中BMCs所存在的缺陷及其对于血小板生成支持作用的改变,为完善ITP的发病机制以及相关针对性治疗提供新的方向。实验方法:骨髓样本分别取自7名ITP患者及5名正常对照者,全骨髓贴壁培养法培养得到BMCs;流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测细胞表面蛋白CD105、CD90、CD73、CD34、CD45、CD19、CD11b、HLA-DR的表达状况,进行表型鉴定;Cell counting Kit 8(CCK8)法检测细胞增殖,Annexin V/PI双染法检测细胞基础凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测BMCs中IL-6、IL-11、TPO、SCF的基因和蛋白表达水平。佛波酯(Phorbol12-myristate 13-acetate,PMA)诱导HEL细胞,构建巨核系分化模型,体外生成具有巨核细胞表型的细胞。用丝裂霉素C抑制BMCs增殖,将其制备成饲养层细胞。将诱导后的HEL细胞进行分组,并与不同来源的BMCs体外直接接触共培养,随后收集细胞,FCM检测共培养后的细胞表面CD41a、CD42b表达水平以及凋亡状况;实验结果:通过全骨髓贴壁培养法从所有ITP患者及正常对照者的骨髓样本中都成功培养出呈典型纺锤体型的贴壁生长细胞,且均符合表型鉴定标准。与正常对照相比,ITP患者来源的BMCs形态扁平增大,随传代次数增加部分失去纺锤体形态;增殖减缓,凋亡增加,体外生存能力下降;细胞因子IL-6及SCF表达缺陷。经PMA诱导后,HEL细胞形态增大,胞核增大,核分叶增加,胞质成熟度增加,细胞表面原始巨核系标志CD41a表达逐渐增加,持续诱导时间72h后,可生成形态及表型与原始巨核细胞相似的类巨核细胞。与正常对照者来源的骨髓间充质细胞共培养可促进类巨核细胞表面CD41a的表达并减少细胞凋亡比率,但ITP来源的BMCs上述支持能力显著减弱。结论:ITP患者来源的BMCs在体外培养条件下存在多种缺陷,包括增殖减缓、凋亡增加,体外生存能力降低;细胞中与巨核系分化成熟相关的部分细胞因子表达缺陷;并且在共培养条件下,对于巨核细胞分化及生存的支持能力减弱。ITP患者中BMCs所存在的诸多缺陷可能是导致其对于巨核系分化发育支持能力减弱,并进一步促成ITP患者血小板生成缺陷的一个潜在因素。