DAT对豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜色素上皮bFGF表达作用的研究

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:maidouqaz
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目的:建立豚鼠形觉剥夺性近视眼动物模型,观察多巴胺转运蛋白、多巴胺及碱性成纤维细胞生长因子在视网膜色素上皮中的表达。方法:随机选取三周龄豚鼠30只,分为3组, A组:未行干预作为正常对照组;B组:右眼采用半透明自制眼罩遮盖2周;C组:右眼采用半透明自制眼罩遮盖1周,去遮盖1周。对各组进行视网膜检影测屈光度、A超测量眼轴及角膜曲率计测量角膜曲率。采用免疫组织化学法检测多巴胺转运蛋白在视网膜的表达定位,RT-PCR检测多巴胺转运蛋白mRNA的表达,Western blot法检测多巴胺转运蛋白及碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达及高效液相色谱-电化学法检测多巴胺的含量。结果:平均屈光度A组为+0.917±0.303 D,B组为-3.541±0.579 D,C组为+0.750±0.223 D;B组与A组差异有统计学意义(P<0.05),其余各组差异无统计学意义(P>0.05)。眼轴长度A组为6.663±0.176mm,B组为8.045±0.318 mm,C组为6.767±0.118 mm;B组与A组比较差异有统计学意义(P<0.05),其余各组差异无统计学意义(P>0.05)。各组实验眼角膜曲率差异无统计学意义(F=0.583,P>0.05)。多巴胺转运蛋白主要表达于视网膜色素上皮层,脉络膜中无表达;在B组呈强阳性表达,在其余各组呈阳性表达;B组多巴胺转运蛋白免疫反应增强主要表现在视网膜色素上皮。豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜色素上皮多巴胺转运蛋白及多巴胺较正常眼表达上调(P<0.05),碱性成纤维细胞生长因子较正常眼表达下调(P<0.05)。多巴胺转运蛋白的表达水平与免疫组织化学的反应强度呈密切正相关(r=0.893,P<0.05);多巴胺转运蛋白的表达水平与多巴胺含量呈密切正相关(r=0.902,P<0.05);多巴胺转运蛋白与碱性成纤维细胞生长因子的表达水平呈密切负相关(r=-0.976,P<0.05)。结论:1.多巴胺转运蛋白、多巴胺及碱性成纤维细胞生长因子在豚鼠视网膜色素上皮均有表达;多巴胺转运蛋白在脉络膜中无表达。2.豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜色素上皮多巴胺转运蛋白表达上调,碱性成纤维细胞生长因子表达下调;多巴胺转运蛋白与碱性成纤维细胞生长因子的表达水平呈密切负相关。目的:观察外源性多巴胺转运蛋白反义寡核苷酸作用下,豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜色素上皮多巴胺转运蛋白及碱性成纤维细胞生长因子的表达改变,探讨多巴胺转运蛋白对豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜色素上皮碱性成纤维细胞生长因子表达的调控。方法:随机选取三周龄豚鼠50只,分为5组, A组:未行干预作为正常对照组;B组:右眼采用半透明自制眼罩遮盖2周;C组:右眼采用半透明自制眼罩遮盖2周,同时予玻璃体腔内注射多巴胺转运蛋白反义寡核苷酸,浓度为0.02nmol/ul;D组:右眼采用半透明自制眼罩遮盖2周,同时予玻璃体腔内注射多巴胺转运蛋白核苷酸,浓度为0.02nmol/ul;E组:右眼采用半透明自制眼罩遮盖2周,同时予玻璃体腔内注射等量生理盐水作为阴性对照。对各组进行视网膜检影测屈光度、A超测量眼轴及角膜曲率计测量角膜曲率。采用RT-PCR检测多巴胺转运蛋白mRNA的表达;Western blot法检测多巴胺转运蛋白及碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达及高效液相色谱-电化学法检测多巴胺的含量;并采用TUNEL染色,观察多巴胺转运蛋白反义寡核苷酸对视网膜有无毒性作用。结果:平均屈光度A组为+0.917±0.303 D,B组为-3.542±0.579 D,C组为-0.125±0.628 D,D组为-3.583±0.665 D,E组为-3.792±1.111D;B组、C组、D组及E组与A组比较差异有统计学意义(P<0.05),C组与B组差异有统计学意义(P<0.05),D组、E组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组实验眼眼轴长度为6.625±0.108mm,B组为8.052±0.317 mm,C组为6.702±0.140 mm,D组为7.755±0.120 mm,E组为7.893±0.249 mm;B组、C组、D组及E组与A组比较差异有统计学意义(P<0.05),C组与B组差异有统计学意义(P<0.05),D组、E组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组实验眼角膜曲率差异无统计学意义(F=0.305,P>0.05)。多巴胺转运蛋白反义寡核苷酸可使豚鼠视网膜色素上皮多巴胺转运蛋白mRNA及蛋白表达下调(P<0.05),同时可使碱性成纤维细胞生长因子较正常眼表达上调(P<0.05)。多巴胺转运蛋白与碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达水平呈密切负相关(r=-0.973,P<0.05)。结论:1.多巴胺转运蛋白反义寡核苷酸可抑制豚鼠由于形觉剥夺所引起的近视眼以及相应的眼轴延长,同时可引起视网膜色素上皮中的多巴胺转运蛋白表达下调及碱性成纤维细胞生长因子表达上调。2.多巴胺转运蛋白可能通过调控视网膜色素上皮碱性成纤维细胞生长因子的表达,从而影响豚鼠形觉剥夺性近视眼的形成。
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