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[目的]： 检测α-烯醇酶（α-enolase，ENO1）在胃癌组织的表达水平，研究ENO1表达与胃癌进展的相关性;通过体外实验，研究ENO1对胃癌细胞株AGS增殖、迁移等恶性生物学行为的影响，为揭示ENO1与胃癌发生、发展的关系提供实验依据。 [方法]： 1.采用免疫组织化学法，检测ENO1在不同病理进展的胃癌组织的表达情况:利用ENO1兔抗人多克隆抗体对22例胃腺癌标本、18例正常胃黏膜组织标本和20例非典型增生组织标本进行了免疫组化检测，观察ENO1在胃癌组织的表达水平。 2.克隆人eno1基因，构建真核表达载体pcDNA3.1/eno1:根据人eno1基因序列(GenBank: NM001428.3)设计引物，扩增eno1基因编码区序列，并采用T-A克隆法将目的基因连接于pMD18-T载体。限制性内切酶EcoR1和Xba1分别双酶切pMD18-T/eno1和真核表达载体pcDNA3.1(+)，体外连接构建真核表达载体pcDNA3.1/eno1并测序。 3.真核表达载体pcDNA3.1/eno1经脂质体（LipofectamineTM2000）转染胃癌细胞株AGS，实时荧光定量RT-PCR和Western Blot检测eno1 mRNA和蛋白在AGS细胞内的表达水平。 4.通过CCK-8细胞增殖实验、平板集落形成实验和细胞划痕实验，研究过表达eno1基因对AGS细胞增殖、迁移能力的影响。 5.合成针对eno1基因的小干扰RNA(siRNA)，转染AGS细胞，通过CCK-8细胞增殖实验、平板集落形成实验和细胞划痕实验，研究siRNA干扰eno1基因表达对AGS细胞增殖、迁移能力的影响。 [结果]： 1.ENO1在胃癌组织的表达 免疫组化的检测结果显示，ENO1的高表达率在胃腺癌中为27.2％(6/22)，而在正常胃黏膜组织和非典型增生组织中均为0％。ENO1在胃腺癌组织的表达水平与正常胃黏膜组织和非典型增生组织相比，差别具有统计学意义(HC=22.70，P＜0.05)。 2.真核表达载体pcDNA3.1/eno1的构建 RT-PCR扩增获得eno1基因的编码区序列(1305bp)，琼脂糖凝胶电泳和测序证实与预期序列一致;利用基因工程技术，体外连接eno1基因与载体pcDNA3.1(+)，构建真核表达载体pcDNA3.1/eno1，并经琼脂糖凝胶电泳和测序证实构建成功。 3.Eno1基因过表达对AGS细胞增殖、迁移能力的影响 将真核表达载体pcDNA3.1/eno1和空载体peDNA3.1分别转染AGS细胞，实时荧光定量RT-PCR和Western Blot发现，pcDNA3.1/eno1组较空载体pcDNA3.1组相比，eno1基因mRNA和蛋白表达量高。同时，CCK-8细胞增殖实验发现，在转染的72小时，pcDNA3.1/eno1组细胞增殖水平高于pcDNA3.1空载体组(t=3.44，P＜0.05);平板集落实验发现，10天后，pcDNA3.1/eno1组集落形成数量明显高于pcDNA3.1组（t=5.26， P＜0.05）;细胞划痕实验发现，在48个小时后，pcDNA3.1/eno1组划痕愈合速度快于空载体pcDNA3.1组（t=7.35， P＜0.05），差异具有统计学意义。 4.siRNA干扰eno1基因表达对AGS细胞增殖、迁移能力的影响将针对eno1基因的小干扰RNA（ENO1-siRNA）和空白对照（NC-siRNA）分别转染AGS细胞，实时荧光定量RT-PCR和Western Blot发现干扰组ENO1-siRNA与空白对照组(NC-siRNA)相比，eno1基因mRNA和蛋白表达量较低。同时，CCK-8细胞增殖实验发现，在转染的72小时，ENO1-siRNA组细胞增殖水平低于NC-siRNA空载体组(t=2.50，P＜0.05);平板集落实验发现，10天后，ENO1-siRNA组集落形成数量明显低于NC-siRNA组(t=22.05，P＜0.05);细胞划痕实验显示，在48个小时后，ENO1-siRNA组划痕愈合速度慢于空白对照组(NC-siRNA)(t=8.54，P＜0.05)，差异具有统计学意义。 [结论]： 1.ENO1在胃癌组织的表达水平明显高于正常胃黏膜组织和非典型增生组织，提示ENO1表达与胃癌的进展有关; 2.体外实验发现，过表达eno1基因可使胃癌AGS细胞的增殖及迁移能力增强;siRNA干扰eno1基因表达，可使AGS细胞的增殖及迁移能力减弱，提示ENO1可能是与胃癌细胞增殖及迁移密切相关的分子靶标。