芡实提取物对克氏原螯虾免疫功能的影响

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克氏原螯虾(Procambarus clakii)是世界淡水螯虾中最重要的养殖品种之一,但由于缺乏科学管理经验、疏于病害防治,养殖中经常会出现病害频发的现象。在现代养殖过程中,抗生素经常被用于预防和治疗水生动物疾病,但过度使用抗生素亦存在很多潜在的危险,这可能导致产生抗生素耐药细菌,并最终危及人类或动物的健康。因此寻找一种安全高效的抗生素替代品成为水产养殖业的研究热点。有研究表明,芡实(Euryale Ferox)的粗提物具有抗氧化的功效,同时对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、温和气胞菌(Aeromonas sobria)等多种致病菌具有明显的抑菌效果。为了寻找新的防控克氏原螯虾疾病的绿色药物,本研究以芡实为原料,将其乙醇提取物按不同浓度(0g·kg-1、5g·kg-1、10g·kg-1和20g·kg-1,分别对应对照组、0.5%芡实组、1%芡实组和2%芡实组)添加到克氏原螯虾饲料中,随后将这种饲料在人工构建的模拟生态养殖系统环境下连续投喂克氏原螯虾28d后,测定其血清中SOD、PO、ACP、AKP和肝胰腺中CAT、SOD、ACP、AKP的酶活;检测克氏原螯虾肝胰腺组织中的免疫相关基因CypA、GPxs、AstacidinmRNA的表达;记录其生长参数的变化和嗜水气单胞菌攻毒后存活率的变化,同时探究了肠道组织结构及肠道微生物的变化,以评估芡实的免疫效果及应用价值。此外为了探讨芡实提取物作为免疫制剂是否会影响饲料的适口性,本研究通过行为观察法记录克氏原螯虾对含有芡实提取物免疫制剂的饲料浓度、大小、颜色和形状的选择时间和选择频次,评估其对克氏原螯虾食物选择的影响。研究表明:1、饲喂28d后,0.5%、1%和2%芡实组克氏原螯虾的存活率均高于对照组;对照组和0.5%芡实组克氏原螯虾生长速度较快,0.5%芡实组存活率显著提高,而各组间的终末质量、增重率、特定生长率不存在显著性差异;嗜水气单胞菌攻毒后,各实验组之间的存活率不存在统计学差异,但0.5%和2%芡实组克氏原螯虾的存活率均高于对照组,并且0.5%芡实组的免疫抑制率最高,为20%。表明适量浓度的芡实提取物可以提高克氏原螯虾的存活率。2、与对照组相比,0.5%芡实组克氏原螯虾血清中的ACP和AKP活性显著增加,2%芡实饲料添加组克氏原螯虾血清中的SOD活性显著增加;1%和2%芡实饲料添加组克氏原螯虾肝胰腺中的ACP活性显著降低,但血清中PO活性没有明显变化;0.5%芡实饲料添加组克氏原螯虾肝胰腺中的ACP活性显著增加,但SOD、CAT、AKP的活性均没有显著变化;与对照组相比,2%芡实饲料添加组克氏原螯虾CypA和GPxs mRNA的相对表达量显著增加,Astacidin mRNA的相对表达量在各组之间均无显著差异。这些结果表明芡实提取物可以作为抗氧化剂添加到饲料中提高克氏原螯虾的抗氧化能力,并且饲料中适量浓度的芡实提取物也可以增强其非特异性免疫能力。3、芡实饲料添加组克氏原螯虾肠道的结缔组织的致密性优于对照组;0.5%和2%芡实组克氏原螯虾肌肉束相较于对照组更完整,并且肠道内的褶皱增多,表明饲料中适量浓度的芡实提取物可以改善肠道结构;分析肠道微生物发现,相较于对照组,克氏原螯虾肠道微生物群落结构未发生改变,肠道菌群在门水平的丰度未发生明显改变;而在属水平上,四组克氏原螯虾的肠道微生物菌群存在显著差异,其中2%芡实组克氏原螯虾肠道中有益细菌孢噬纤维菌属(Sporocytophaga)显著增加,这可能有助于促进肠道的消化和增强免疫力。4、芡实提取物免疫制剂的饲料浓度、大小、颜色和形状对克氏原螯虾的食物选择时间和食物选择频次均没有显著的影响。表明制剂饲料的浓度、大小、颜色和形状不会影响克氏原螯虾的食物选择。综上所述,饲料中添加适量浓度的芡实提取物不会影响克氏原螯虾的生长,可以提高克氏原螯虾的抗氧化能力和免疫力,可以改善肠道组织结构,不影响肠道微生物群落结构。另外,添加芡实提取物饲料的浓度、大小、颜色和形状不会影响克氏原螯虾的食物选择。因此,芡实提取物可以作为克氏原螯虾的一种免疫增强剂添加进饲料中而不会影响其取食。
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