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目的::观察硼替佐米(BTZ)单药或联合地西他滨(DAC)在体外对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖、凋亡、细胞周期的影响,探讨两药联合的可能效应。倒置相差显微镜成像观察细胞增殖与凋亡。方法::多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226以BTZ 5nmol/L(5n M)、10nmol/L(10n M)、20nmol/L(20n M)单药或联合DAC 0.5mmol/L(0.5m M)处理48小时后,采用倒置相差显微镜成像技术观察各处理组的细胞状态;CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞活率和增殖抑制率;Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、PARP-1的表达。结果::(1)倒置相差显微镜下观察发现:与DMSO对照组相比,BTZ单药组及DAC单药组中细胞密度降低,出现细胞碎片。当BTZ联合DAC时,这些变化更加显著;(2)在BTZ单药处理组中,随着BTZ浓度增加,细胞活率逐渐降低(p<0.05),相同BTZ浓度下,DAC+BTZ组活率明显减少。BTZ对骨髓瘤细胞的增殖抑制作用与剂量正相关,与BTZ单药组相比,DAC和BTZ联合组对骨髓瘤细胞的增殖抑制作用更为显著(p<0.05),采用金式公式计算协同指数:不同浓度BTZ(5n M、10n M、20n M)联合DAC时的q值分别为1.54、1.23、1.06,根据金式公式的判断标准BTZ(5n M、10n M)与DAC联合有协同作用,BTZ(20n M组)与DAC有相加作用;(3)Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡证实BTZ及DAC单药可诱导RPMI8226发生凋亡。其中随着BTZ的浓度增加,凋亡细胞比率增加,差异明显(p<0.05)。相比于单药组,DAC+BTZ合用组凋亡细胞比率增高,具有统计学差异(p<0.05);(4)细胞周期检测显示:与DMSO对照组相比,BTZ单药处理组中,随着BTZ浓度增加,G0-G1期细胞比率递增,S期、G2-M期细胞比率递减(p<0.05);与BTZ单药及DAC单药组相比,DAC+BTZ联合组对RPMI8226的G0-G1期阻滞作用更加显著(p<0.05)。(5)Western blot方法检测凋亡相关蛋白显示:BTZ在48 h可以导致RPMI8226细胞内的PARP-1发生剪切,同时caspase-3和caspase-9的剪切激活片段也同样增加,当BTZ与DAC联用时,细胞内PAPR-1的剪切以及caspase-3、caspase-9的剪切活化也更加的明显。结论:(1)BTZ对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制,促进凋亡和G0-G1周期阻滞作用,并且与BTZ浓度呈正相关,DAC对RPMI8226细胞也有明显的增殖抑制,促进凋亡和G0-G1周期阻滞作用,(2)两药合加在BTZ不同浓度有不同的相互作用,在低浓度5n M和中浓度10n M时有协同作用,在高浓度20n M时有相加作用。(3)BTZ单药均可诱发细胞内PAPR-1的剪切以及caspase-3、caspase-9的剪切活化,合加组此现象更为明显,提示BTZ与DAC联合作用于RPMI8226细胞,诱导凋亡相关蛋白活化,最终引发细胞凋亡。