小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种严重的烈性、接触性传染病,是世界动物卫生组织(OIE)法定报告的动物疫病。2007年7月我国首次发生该病,2013年12月以来该病在我国大规模流行,造成严重危害。因此,加强对小反刍兽疫病毒基础及应用研究具有重要的现实意义。本研究就小反刍兽疫病毒H基因进行了真核表达,并研究了其过表达后对病毒增殖的影响,以期为提高疫苗产量提供一定的基础。设计引物通过RT-PCR扩增小反刍兽疫病毒N基因,连接到克隆载体pMD 19-T上,构建质粒标准品。利用SYBR GreenⅠ法进行荧光定量PCR,建立标准曲线,并进行特异性试验、敏感性试验和重复性试验。结果表明,Ct值与质粒拷贝数对数值呈很好的线性关系,特异性和重复性良好,检测灵敏度可达2.82拷贝/μL,是普通PCR的1000倍。设计引物通过RT-PCR扩增小反刍兽疫病毒H基因全长编码区序列,并将其连接至真核表达载体pEGFP-C3上,经鉴定正确后转染CHS-20细胞,并通过RT-PCR、荧光观察及Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测H基因的表达。结果表明,H基因在CHS-20细胞内得到了表达。将pEGFP C3-PPRV H重组质粒、空载体pEGFP-C3转染CHS-20细胞,待H基因表达后,接种PPRV Nigeria 75/1,病毒增殖一定时间后,以β-Actin作为内参基因,采用相对荧光定量RT-PCR法研究病毒增殖量的变化。结果表明,相对于未转染及转染空载体pEGFP-C3的细胞,转染pEGFP C3-PPRV H重组质粒的细胞PPRV增殖量得到了提高,且具有差异显著性。说明PPRV H基因过表达后促进了PPRV增殖。