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目的:有研究表明不同来源的造血干细胞的一些归巢相关分子表达存在差异,这可能与脐血造血干细胞植入能力低下有关。本研究旨在通过研究不同来源人CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内归巢来验证脐血(UCB)来源HSC体内归巢能力是否与其表达归巢相关分子CXCR4相关。
材料与方法:利用Ficoll-Hypaque分离液(密度为1.077g/L)从UCB、动员外周血(mPB)和骨髓(BM)中分得单个核细胞,再经免疫磁珠法(MACS)富集纯化CD34+细胞。流式细胞术(FACS)检测分选后CD34+细胞的纯度及其膜表面CXCR4的表达。CD34+细胞或标记荧光染料CFSE的CD34+细胞(5×105~1×106个细胞/只)由尾静脉注射至照射的NOD/SCID小鼠。移植后20小时处死小鼠。FACS检测移植鼠骨髓和脾脏中已归巢不同来源的人CD34+细胞。鼠股骨制成组织切片在荧光显微镜下观察。
结果:我们从UCB、mPB和BM中分得(1.63±0.36)×104/mL,(2.10±0.29)×108/mL,(7.19±0.74)×106/mLCD34+细胞。经MACS富集的CD34+细胞纯度达(93.67±2.80)%。新鲜UCB、冻存UCB、mPB和BMCD34+细胞膜表面CXCR4表达率分别为(49.52±1.12)%,(46.12±2.29)%,(48.50±2.48)%和(65.39±1.27)%。新鲜UCB、冻存UCB、mPB和BMCD34+细胞在NOD/SCID小鼠骨髓归巢效率分别为(3.18±0.29)%,(3.06±0.18)%,(4.38±0.36)%和(5.76±0.52)%。新鲜UCB、冻存UCB、mPB和BMCD34+细胞在NOD/SCID小鼠脾脏归巢效率分别为(1.88±0.12)%,(1.80±0.15)%,(1.90±0.22)%和(2.16±0.34)%。
结论:我们的结果显示UCBCD34+细胞膜表面CXCR4水平低于mPB和BM。经冻存复苏后,UCBCD34+细胞膜表面CXCR4水平有所下调。UCB在照射NOD/SCID小鼠骨髓的归巢效率低于mPB和BM,然而与其低表达膜表面CXCR4并未呈现相关性。