一、兔膝创伤性关节炎负重面软骨缺损模型的建立和分析鉴定目的:探讨一种符合临床上关节内炎性环境改变、关节软骨缺损的创伤性兔膝关节炎的模型的建立方法。方法:在无菌操作下,取3月龄的新西兰大白兔,通过切断兔膝关节内侧副韧带和前交叉韧带造成失稳环境,同时切除内侧半月板,并且在股骨内侧髁打孔来建立早中期的兔膝关节炎软骨缺损模型,在不同时间段观察兔膝关节的大体外观、组织形态学变化,并制备病理切片行Wakitani’s组织学评分,比较各组建模动物关节软骨改变情况并对其进行分析。结果:从外观上,关节炎对软骨的破环呈进行性的加重趋势,建模后的动物软骨缺损范围出现进行性的增大;4周时缺损有很薄一层半透明状组织修复,8周时乳白色组织增生,周围出现部分软骨的磨损,关节面软骨变的薄厚不均匀,12周时出现较大范围的软骨磨损,深处可见松质骨,周围有纤维组织增生粘连,关节活动明显受限,16周时软骨组织出现大范围磨损,纤维结缔组织和骨赘增生,关节面失去光泽与正常的形态,关节腔出现粘连,活动性消失。组织学上,正常的软骨细胞逐渐消失,代之以纤维组织细胞增生。结论:离断兔后腿膝关节内侧副韧带、前交叉韧带,切除内侧半月板,并且在股骨内侧髁关节面打孔,在改变膝关节应力的同时破坏关节面软骨,可在较短时间内形成一个创伤性膝关节负重面关节软骨缺损的骨关节炎的实验模型。二、早中期兔膝关节炎模型软骨缺损的修复研究分析目的:探索观察壳聚糖温敏性水凝胶、富血小板纤维蛋白(PRF)以及骨髓间充质干细胞(BMSCs)/PRF壳聚糖温敏性水凝胶对于内环境较差的负重面关节软骨缺损的修复情况,并探索研究其对内环境较差的陈旧性软骨缺损修复能力。方法:取已经建模成功4周的兔子,从膝关节原手术切口进入,用手摇钻将陈旧缺损内纤维肉芽组织磨除,将制备好的填充物填入缺口,尽可能缝合内侧副韧带、修复前交叉韧带,建立共三个处理组(壳聚糖组、PRF组、复合物组),每组15只兔子。在修复缺损后分4周、8周、12周三个时间段,取出关节按照ICRS及Cook’s大体评分进行评分。取标本后制备石蜡切片、进行多种染色(HE染色、阿利新蓝染色、番红-O染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色)观察染色变化,并通过Wakitani’s组织学评分进行分析。结果:进行实验的45只实验兔滑膜组织出现不同程度的增生和肥大。壳聚糖组:各个时间段的软骨缺损都比较明显,初期可见少许纤维蛋白覆盖缺损底部,然后软骨表面逐渐开始退变,软骨细胞出现核浓缩,关节表面变形;PRF组:缺损处逐渐有半透明修复组织形成,颜色与周围正常组织相似,表面基本平整、光滑,与临近组织融合无明显分界,有软骨细胞生成、II型胶原形成。复合物组:膝关节软骨缺损处修复良好,新生软骨在大体观和染色中与周边组织相似,可见大量软骨细胞、II型胶原生成。结论:1、壳聚糖支架对于兔膝创伤性关节炎陈旧性的软骨缺损的修复能力很弱。2、PRF对于兔膝创伤性关节炎陈旧性的软骨缺损有一定的修复效果,表明细胞因子对于关节软骨缺损的修复有一定的作用。3、复合物对与兔膝创伤性关节炎陈旧性的软骨缺损较壳聚糖和PRF更好。