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目的:IL-1β能促进滑膜细胞增殖及炎症反应从而导致骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)的发生,但目前其具体机制尚不清楚。基于IRAK-4在炎性TLR信号通路中的枢纽作用,探讨IRAK-4在IL-1β刺激膝关节OA成纤维样滑膜细胞增殖及炎症调控中的作用及其机制,以期为OA的治疗提供新的方法。方法:1、提取7例膝关节OA滑膜组织和6例正常的膝关节滑膜组织,应用免疫组化检测正常滑膜组织与OA滑膜组织中IRAK-4、IKK及NF-κB的表达情况。2、用流式细胞术鉴别所提取的原代细胞类型。3、用不同浓度的IL-1β(0、1、5、10、15ng/ml)培养OA成纤维样滑膜细胞,同时用10ng/ml IL-1β作用OA成纤维样滑膜细胞不同时间(0、3、6、12、24h),CCK-8检测滑膜细胞的增殖情况。4、用CCK-8分析不同干扰因素对原代OA成纤维样滑膜细胞增殖情况;设置CON组(不加任何转染试剂)、IL-1β组(OA滑膜细胞中加入10ng/ml IL-1β)、nc组(scrambled control siRNA序列进行转染)、SI-IRAK4组(以IRAK-4-siRNA序列进行转染)、IL-1β+nc组(在IL-1β组的基础上以scrambled control siRNA序列进行转染)、和IL-1β+SI-IRAK4组(在IL-1β组的基础上以IRAK-4-siRNA序列进行转染),在24小时后进行CCK-8实验,通过OD值反应不同干扰因素对成纤维样滑膜细胞的增殖和生长的影响。5、将提取的OA成纤维样滑膜细胞分为CON组(不加任何转染试剂)、IL组(OA滑膜细胞中加入10ug/ml IL-1β)、NC组(在IL组的基础上以scrambled control siRNA序列进行转染)和SI组(在IL组的基础上以IRAK-4-siRNA序列进行转染),用Western Blot检测细胞中IRAK-4蛋白含量,判断沉默效果。同时通过Western Blot检测TLR/IL-1通路中IKK及NF-κB表达,探讨IRAK-4作用机制。结果:1、通过免疫组化发现IRAK-4、IKK及NF-κβ在正常滑膜组织和骨性关节炎滑膜组织均有表达,且在骨性关节炎的滑膜组织中以上蛋白表达均高于正常的滑膜组织;2、从滑膜组织中提取原代细胞,利用流式细胞术鉴定显示滑膜细胞分子标记蛋白Vimentin-PE阳性率达到95%,证明所提取的细胞为成纤维样滑膜细胞。3、不同浓度的IL-1β及不同干扰时间点对OA成纤维样滑膜细胞的增殖都有影响,并且10ng/ml的IL-1β作用最强和干扰24小时的OA成纤维样滑膜细胞增殖最多。4、通过CCK-8检测发现Si-IRAK4对OA成纤维样滑膜细胞的增殖没有影响,SI-IRAK4组的成纤维样滑膜细胞增殖率与nc组比较无明显统计学差异(P>0.05)。CON组及nc组相比较无明显统计学差异(P>0.05)。但SI-IRAK4能抑制IL-1β诱导的OA成纤维样滑膜细胞增殖,IL-1β+SI-IRAK4组成纤维样滑膜细胞的增殖率明显高于IL-1β+nc组,两组相比较有明显的统计学差异(P<0.0001)。IL-1β+nc组和IL-1β组相比较无明显统计学差异(P>0.05)。5、通过Western Blot检测发现IL-1β能使OA成纤维样滑膜细胞的IRAK-4、NF-κB、IKK蛋白表达明显增高,与CON组比较P值分别为0.010、0.022、0.043,表明IL组中三种蛋白的表达与CON组比较均有明显的统计学意义(P<0.05)。在NC组中NF-κB、IKK蛋白的表达与IL组比较P值分别为0.305、0.179,两组比较均无明显的统计学差异(P>0.05)。但在SI组中NF-κB、IKK蛋白的表达与NC组比较P值分别为0.004、0.027,两组比较存在明显的统计学差异(P<0.05)。结论:IRAK-4在IL-1β刺激膝关节OA成纤维样滑膜细胞的增殖中起到关键作用,并且以IRAK-4为靶点使用IRAK-4-siRNA可抑制膝关节成纤维样滑膜细胞的增殖及炎症,为OA的治疗提供新的方法。