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目的:研究食管鳞状细胞癌差异蛋白的筛选及其临床意义。方法:(1)通过激光捕获显微切割技术分别从活检的新鲜肿瘤组织获取哈萨克族、汉族食管鳞癌细胞和癌旁远端食管正常上皮细胞的纯化细胞。(2)通过双向电泳联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测获得表达差异蛋白。(3)使用蛋白质印迹和免疫组化技术对差异候选蛋白Bmi-1,PAI-1,Cofilin-1和Transgelin进行分析、验证。(4)对Bmi-1,PAI-1,Cofilin-1,Transgelin与食管鳞状细胞癌临床病理参数,如性别、年龄、民族、肿瘤大小、分化程度、病理分型、浸润深度、淋巴结转移、临床分期,及预后等方面的关联,初步探讨Bmi-1,PAI-1,Cofilin-1和Transgelin在食管癌发生发展中的作用。结果:(1)激光捕获显微切割技术捕获了较纯净的哈萨克族和汉族的食管鳞癌细胞及癌旁远端食管正常上皮细胞。(2)通过双向电泳联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定出43个有意义的差异蛋白,其中在哈萨克族和汉族的食管鳞癌组织表达均上调的点有25个。在哈萨克族和汉族的食管鳞癌组织均下调的蛋白点有14个。还有4个蛋白在哈萨克族和汉族食管鳞癌组织中表达不一致。(3)在哈萨克族和汉族的食管鳞癌组织表达均上调的蛋白中,根据蛋白得分值,匹配肽段覆盖率,结合研究报道较少等因素,从中筛选出四个蛋白质Bmi-1,PAI-1,Cofilin-1和Transgelin。Bmi-1,PAI-1,Cofilin-1和Transgelin在哈萨克族、汉族食管鳞癌组织中的表达经过蛋白质印迹和免疫组化验证,表达明显高于食管正常组织。免疫组化结果:Bmi-1,PAI-1,Cofilin-1和Transgelin在食管鳞癌组织中表达的阳性率为78.75%(P<0.05)、76.25%(P<0.05)、60.00%(P<0.05)、55.00%(P<0.05),高于在正常食管组织的表达。(4)分析Bmi-1,PAI-1,Cofilin-1和Transgelin在食管鳞癌与性别、年龄、民族、肿瘤大小、分化程度、病理分型、浸润深度、淋巴结转移、临床分期的表达情况。Bmi-1的表达:在有淋巴结转移和无淋巴结转移食管鳞癌患者组织中,Bmi-1的阳性表达率分别为63.0%和86.8%,P<0.05,两组之间差异有统计学意义。在不同浸润深度食管鳞癌患者组织中Bmi-1的阳性表达率,肿瘤细胞侵润食管粘膜或肌层为92.3%,浸润食管纤维膜及周围结构为72.2%,P<0.05,差异有统计学意义,结果表明Bmi-1的表达可能与食管癌组织的浸润程度有关。PAI-1的表达:在食管鳞癌患者中,在有淋巴结转移和无淋巴结转移食管鳞癌患者组织中,PAI-1的阳性表达率分别为59.3%和84.9%,P<0.05,两组之间差异有统计学意义,表明PAI-1的表达可能与食管癌组织的淋巴结转移有关。肿瘤细胞浸润食管粘膜或肌层为53.8%,肿瘤浸润食管纤维膜及周围结构阳性表达率87.0%,P<0.05,差异有统计学意义,结果表明PAI-1的表达可能与食管癌组织的浸润迁移有关。Cofilin-1的表达:食管鳞癌患者中,在高分化、中分化和低分化食管鳞癌患者组织中Cofilin-1的阳性表达率分别为26.1%、78.3%和70.6%,P<0.05,差异有统计学意义,表明Cofilin-1的表达可能与食管癌组织的分化程度有关,提示表达率高恶性程度高,与预后相关。在有淋巴结转移和无淋巴结转移食管鳞癌患者组织中,Cofilin-1的阳性表达率分别为88.9%和45.3%,P<0.05,两组之间差异有统计学意义,表明Cofilin-1的表达与食管癌组织的淋巴结转移有关。在临床分期Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期食管鳞癌患者组织中Cofilin-1的阳性表达率分别为37.1%和77.8%,P<0.05,两组之间差异有统计学意义,表明Cofilin-1的表达可能与食管癌的临床分期有关。Transgelin的表达:在高分化、中分化和低分化食管鳞癌患者组织中Transgelin的阳性表达率分别为34.8%、52.2%和70.6%,P<0.05,差异有统计学意义,表明Transgelin的表达可能与食管癌组织的分化程度有关,提示表达率高恶性程度高,与预后相关。在有淋巴结转移和无淋巴结转移食管鳞癌患者组织中,Transgelin的阳性表达率分别为88.9%和37.7%,P<0.05,两组之间差异有统计学意义,表明Transgelin的表达与食管癌组织的淋巴结转移有关。结论:(1)本研究提示激光捕获显微切割技术可以有效地解决组织异质性的问题,能较好地获取较为纯净的目的细胞。(2)食管鳞癌和正常食管上皮细胞的差异蛋白质图谱提示食管鳞癌的发生发展是多基因参与、多种蛋白质功能共同协同发挥作用的结果。(3)蛋白质印迹技术和免疫组化分析Bmi-1,PAI-1,Cofilin-1,Transgelin的验证结果与蛋白质组学技术的分析鉴定结果相一致。(4)Bmi-l、PAI-1、Cofilin-1和Transgelin这四个蛋白在食管鳞癌组织中表达上调,与食管鳞癌的分化程度、侵润、淋巴转移有关,在食管鳞状细胞癌的发生和发展中可能起一定作用,并且对食管鳞状细胞癌恶性程度及其预后有指导意义,为食管鳞癌分子靶向治疗和新的抗癌药物开发提供有价值的理论依据。