论文部分内容阅读
目的:本研究通过生物信息学方法分析MYEOV在胰腺癌数据集中表达水平及其与患者生存预后相关性,进一步通过体外细胞实验研究MYEOV在人胰腺癌细胞系中的表达水平,及MYEOV表达下调对胰腺癌SW1990细胞增殖和迁移能力的影响,并探讨其可能作用的机制,以期发现胰腺癌诊断和预后评估的标志物,及治疗的潜在靶点。方法:首先在TCGA、GTEx和CCLE数据中分析MYEOV的表达水平和临床价值,并在Oncomine数据库中检验。采用实时荧光定量PCR和Western Blot检测6株胰腺癌细胞系和人正常胰腺细胞系HPDE6中MYEOV m RNA和蛋白表达水平。进一步构建两个慢病毒介导的靶向MYEOV sh RNA,转染SW1990细胞株获得SW1990-sh1和SW1990-sh2两个实验组,以空白质粒转染作为阴性对照组,未处理的SW1990细胞为空白对照组;实时荧光定量PCR和Western Blot分别检测四组细胞中MYEOV m RNA与蛋白的表达水平;采用CCK-8法测定下调MYEOV表达对SW1990细胞体外增殖能力的影响;通过划痕实验分析细胞迁移能力的变化;实时荧光定量PCR检测四组细胞中TGF-β通路的主要基因m RNA表达情况。结果:1.生物信息学分析:TCGA数据库中MYEOV在胰腺癌中表达较高,其高表达与胰腺癌患者临床预后不良相关;GTEx数据库中MYEOV在正常胰腺组织中低表达,CCLE数据库中MYEOV在胰腺癌细胞系中高表达;Oncomine数据库中多数胰腺癌数据集中MYEOV在癌组织中表达升高。2.细胞实验:与正常胰腺导管上皮HPDE6细胞相比,MYEOV m RNA在6株胰腺癌细胞中表达水平明显增加(P<0.01),但仅在PANC-1和SW1990细胞中检测到MYEOV蛋白的表达,筛选出SW1990细胞进行后续实验。SW1990细胞经MYEOV sh RNA慢病毒转染后,MYEOV m RNA及蛋白表达均明显下调(P<0.001),而且细胞增殖和迁移能力明显下降(P<0.001)。同时MYEOV表达下调后TGF-β通路中SMAD1、SMAD4、SMAD5和SMAD9 m RNA表达也发生下调(P<0.01),而SMAD2、SMAD3和SMAD7m RNA仅在SW1990-sh2组中表达下调(P<0.01)。结论:MYEOV在胰腺癌中表达较高,在癌旁和正常胰腺组织中低表达,MYEOV高表达的胰腺癌患者临床预后不良。MYEOV在体外胰腺癌细胞系中转录水平高,MYEOV可能通过激活TGF-β/SMAD信号通路促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力。因此,MYEOV有望成为胰腺癌的诊断和预后评估的标志物,为胰腺癌的生物治疗提供新的潜在靶点。