【摘 要】
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目的:手术应激可以导致机体免疫功能受损,使得机体对病原微生物的易感性增加,术后并发症和死亡率相应升高,但对其确切机制缺乏了解。NOD1和NOD2是新近发现的一类模式识别受体
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目的:手术应激可以导致机体免疫功能受损,使得机体对病原微生物的易感性增加,术后并发症和死亡率相应升高,但对其确切机制缺乏了解。NOD1和NOD2是新近发现的一类模式识别受体,在固有免疫细胞针对胞内菌启动免疫应答过程中发挥重要作用。本课题拟通过比较腹腔镜手术和开腹手术不同时间点NOD1和NOD2表达水平及功能的变化,探讨不同手术方式引起的应激反应对NOD1和NOD2介导的固有免疫应答反应的影响。方法:选取2014年09月至2015年3月就诊于苏州大学附属儿童医院普外科诊断为急性阑尾炎且具有手术指征患儿共30例,随机分成腹腔镜阑尾切除术组(Laparoscopic appendicectomy,LA)和开腹阑尾切除术组(Open appendicectomy,OA),分别于术前、术后及术后1天采集外周血2ml,提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),应用Real-time PCR检测PBMCs中NOD1、NOD2基因的表达水平;另外全血分别经Tri-DAP、MDP刺激后收集上清液,应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定上清液中肿瘤坏死因子-ɑ(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-ɑ)和白细胞介素6(Interleukin 6,IL-6)的浓度;采用Western-Blot法检测LA组及OA组各个时间点NOD信号通路的活化水平。结果:1.在LA组,术后NOD1、NOD2表达较术前无明显改变,NOD1在术后1天高于术前水平;在OA组,术后NOD1表达较术前明显下降(P<0.01),术后1天基本恢复到术前水平;LA组及OA组术前、术后、术后1天NOD2表达均无明显改变。2.LA组和OA组样本经Tri-DAP和MDP刺激后均表达TNF-α和IL-6。与术前比较,OA组术后Tri-DAP刺激产生TNF-α的水平较低,术后1天基本恢复;LA组术后Tri-DAP刺激产生TNF-α的水平与术前无显著差异。两组样本手术前后Tri-DAP刺激产生IL-6的水平无明显差异。两组样本手术前后MDP刺激产生TNF-α和IL-6的水平也无明显差异。3.PBMCs经Tri-DAP和MDP分别刺激后,LA组在各个时间点RIP2磷酸化水平无明显变化;而OA组在术后及术后1天RIP2磷酸化水平均明显降低。结论:1.手术应激可以引起NOD1表达水平降低,但对NOD2的表达没有影响。与开腹手术相比,腹腔镜手术可以明显缓解手术应激对NOD1表达水平的影响。2.手术应激可以引起NOD1介导的TNF-α表达水平降低,但对IL-6的表达没有影响。与开腹手术相比,腹腔镜手术可以明显缓解手术应激对NOD1介导的TNF-α表达的影响。手术应激对NOD2介导的TNF-α和IL-6的表达无影响。3.开腹阑尾切除术可以明显抑制NOD1/RIP2和NOD2/RIP2信号通路的活化,而腹腔镜手术则对该信号通路影响不大。
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