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前言 心肌缺血再灌注（Ischemia - Reperfueion，I／R）损伤是一个多因素病理过程，其发生机制与氧自由基产生、钙超载、血管活性物质释放、白细胞浸润、内皮细胞功能障碍等因素有关。近年来国外研究发现，核因子kappa B（nuclear factor kappaB，NF-κB）与I／R损伤的发病机制密切相关。 NF-κB是一类存在于各种组织细胞中的关键性的核转录因子，为Rel蛋白家族成员，以多肽链P50和P65亚基形成同源性或异源性二聚体存在于胞浆中，静息情况下与抑制性蛋白IκB结合呈无活性状态。心肌I／R后造成的氧化应激、复氧、内质网钙离子超载、自由基、细胞因子、内毒素等可以激活NF-κB，激活的NF-κB可诱导表达ICAM-1、iNOS、TNFα和IL-1等，加重心肌炎症损伤。抑制NF-κB的活化可抑制心肌氧化应激反应的发生，抑制中性粒细胞的粘附和组织炎性分子产生，减少心肌坏死范围，改善心肌功能。 本文以缺血再灌注大鼠心肌为研究对象，观察NF-κB抑制剂吡咯基二硫氨基甲酸酯（Pyrrolidine Dithiocarbamate，PDTC）和丹参注射液（Danshen Injection，DI）处理的缺血再灌注大鼠心肌匀浆丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、脂质过氧化物酶（MPO）活性的变化，以及心肌组织NF-κB亚单位p65和细胞间粘附分子-1（Intercllular adhension molecule-1，ICAM-1）、转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGFβ1）蛋白表达变化来研究抑制NF-κB活化对心肌组织的保护作用，并初步探讨丹参注射液抑制NF-κB活化，抗缺血再灌注损伤的可能机制。 材料与方法 1．缺血再灌注动物模型制备：健康雄性SDKp呷e Dawey)大鼠，6－8周龄，体重 236．5士 309，20啪乌拉坦（ig·kg－‘）腹腔注射麻醉，气管插管连接动物人工呼吸机(频率55－60次·分－‘，潮气量 30－40rnl·kg－’人监测标准肢体 11导联心电图。去除左侧第4肋暴露心脏，以动脉圆锥和左心耳交界处的左冠状静脉主干为标志，用4－0无损伤缝针于左心耳根部下方Znun处进针，穿过心肌表层在肺动脉圆锥旁出针，结扎左冠状动脉，lh后松开结扎线进行6h再灌注。以心电图S－T段明显上抬，结扎线以下心肌颜色变暗，松开结扎线后S－T段下降大于l／2为模型成功的标士，be O 2．实验分组：将40只大鼠随机分成4组，每组10只。恤照组卜ontrol rou卜 CG卜左冠状动脉穿线后不结扎，由尾静脉注射生理盐水10rnl·kg－’。②缺血再灌注组OSChCnda－reppifusiongrollP，I／R＊左冠状动脉穿线后由尾静脉注射生理盐水10rnl·kg－‘，稳定10drin后行缺血再灌注处理。③PDTC组uDTC group，PDTCX尾静脉注射 PDTC15mg·kg－’，余同 I／R组。④丹参注射液组(Danshen Iniection roup，DI入尾静脉注射丹参注射液＊·xg－’，余同 vn组。 3．指标检测：实验终点摘取心脏，除去血管J肪、右心室，留左心室心肌分成两份，一份用于制作匀浆，另一份用10％甲醛固定以备病理及免疫组化检测。①心肌匀浆叨D、MDA、MPO：左心室心肌剪碎后制成10％匀浆液，取上清液用硫代巴比妥酸法测定MAD含量，黄膘吟氧化酶法测定SOD活性，酶法测定MPO活性，双缩豚法测定匀浆蛋白质含量。②病理学观察：石蜡切片HE染色后观察心肌组织病理性改变。③免疫组化染色分析：NF－。Bp65、ICAM－1、TGF＊一抗（1100PBS稀释）用 S－P（strepta－ ·2·vidin－perotidase链霉素抗生物素蛋白－过氧化酶）法进行免疫组化染色。以正常兔IgG代替一抗作对照。染色结果判定：NF－KB p65活化表现胞浆、胞核黄染，ICAM刁、TGF民以胞浆黄染为阳性，选取细胞分布均匀的5个高倍（400叫视野作为观察区，计数5个视野内细胞数和 NF－KBp65阳性细胞数，计算阳性细胞率。多媒体病理图像分析系统测定ICAM－l＊GF民平均积分光密度。 4．统计学分析：计量数据用均数。标准差＊）表示，使用SPSS10．0软件进行统计学分析。多组比较用方差分析，两组间比较用配对 t检验，率的检验用x‘检验。P＜0．05为显著性标准。 实验结果 l．乙肌MDA、SOD、MPO变化：I／R组心 肌匀浆MDA含量。＊＊ 活力明显高于＊G组，P＜．0且；＊D活性显著低于＊G组＊＜o0卜＊＊冗和＊组，＊＊A含量、＊＊O活力较yR组明显减少，P＜o．01；60D较＊R组明显恢复，P＜o．01。＊＊TC组和＊1组各指标比较无显著性差异J均＞0．05。 2．心肌病理学改变少R各组心肌排列紊乱，部分区域心肌细胞浊肿，横纹不清或消失，核裂解或消失，缺血中心区有炎性细胞浸润；脂注射液和PDTC组也有心肌细胞变性与坏死改变，但程度较轻，心肌坏死范围较小，坏死周边炎性细胞浸润明显减少。 3．心肌NF－KB P65、ICAM－1、、TGF＊检测小R组心肌中NF－KB p65阳性纲胞率与 ICAM－l积分光密度较 CG组显著增力，P＜o．01；TGF p；积分光密度明显减少，P＜o．01；在P＊TC和丹参注射液组，NF－KB P65与 ICAM－1?