植物抗氰呼吸与交替氧化酶表达的关系

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本论文共分两个部分,第一部分用合成多肽制备抗体考察了绿豆幼苗不同器官抗氰呼吸活性与交替氧化酶表达的关系;第二部分则研究了不同时期春化处理下冬小麦胚芽抗氰呼吸途径以及交替氧化酶表达的的变化特征。 第一部分,我们按照交替氧化酶(Alternative Oxidase,AOX)位于线粒体内膜外侧亲水区S螺旋的氨基酸序列,用固相法合成由12个氨基酸残基组成的多肽,将此多肽与α-牛胰凝乳蛋白酶原A相连,用作半抗原,免疫家兔制备人工合成12肽的抗体。将此抗体与来自绿豆幼苗不同器官线粒体的总蛋白分别进行Western杂交,可观察到绿豆幼苗线粒体中具有两条清晰的AOX杂交带,它们的分子量分别为35kD和38kD。同时,取绿豆幼苗的子叶、真叶和下胚轴,分别测定和计算它们的呼吸参数,可以得知真叶器官组织具有最大的总呼吸(Vt)和交替途径容量(Valt)及交替途径实际运行量(ρ Valt);其次是子叶的Vt和ρ Valt;下胚轴的Vt和ρ Valt最低,但是Valt却高于子叶。绿豆幼苗不同器官的有关呼吸参数测定结果与AOX表达的Western分析基本一致:真叶的Vt特别是ρ Valt最高,它也具有35kD和38kD的AOX的杂交多肽;其次是子叶的Vt和ρ Valt,且在子叶中,只见一条分子量为38kD的AOX多肽;下胚轴的Vt和ρ Valt都最低,Western杂交显示也只有一条分子量为38kD的多肽,而且表达量也较少。35kD的AOX可能对真叶的ρ Valt作出了主要贡献。 第二部分,我们以冬小麦为材料,研究了不同时期非胁迫春化摘要低温处理条件下冬小麦胚芽抗氰呼吸发生、运行和交替氧化酶表达的变化。结果表明:冬小麦胚芽在春化处理初期,伴随着总呼吸速率的上升,抗氰呼吸容量(Valt)和实际运行活性(p Valt)也快速升高,但在春化后期两者均呈下降趋势,与Western blotting结果十分吻合;在整个春化处理期间,抗氰呼吸活性虽有所上升,但相对于细胞色素主路来说,其运行还是处在一个较低的水平,而细胞色素主路则仍然占据了优势。据此我们认为春化处理对抗氰呼吸的诱导只表现在初期,并与冬性植物越冬初期的冷适应有关。
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