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第一部分外源性和内源性小分子dsRNA对膀胱癌细胞中p21蛋白激活表达能力的比较目的:人工合成分别与miR-1236-3p、miR-370-5p所作用的p21基因启动子序列区域完全互补配对的8对小分子dsRNA:dsP21-242、dsP21-243、dsP21-244、dsP21-245和dsP21-552、dsP21-553、dsP21-554、dsP21-555,分别观察其与miR-1236-3p、miR-370-5p在上调人膀胱癌细胞系（T24和EJ）中抑癌基因p21WAF1/CIP1表达能力的不同。方法:8对dsRNA通过参照sa RNA的设计原则设计合成。分别转染dsControl（阴性对照）、miRNA（阳性对照）及对应的dsRNA至T24和EJ细胞,通过qPCR、RT-PCR和Western blot分别检测p21 mRNA和p21蛋白表达水平。结果:qPCR检测显示dsP21-245和dsP21-555均能明显促进两种细胞中p21mRNA水平的升高;与dsControl组相比,dsP21-245分别促进T24和EJ细胞中p21 mRNA的表达至2.32倍（P<0.01）和2.84倍（P<0.001）;与miR-1236-3p组相比,dsP21-245分别在T24和EJ细胞中p21 mRNA表达的差异均没有统计学意义（P>0.05）;与dsControl组相比,dsP21-555均能明显促进T24和EJ细胞中p21 mRNA的高表达（P<0.001,P<0.001）;与miR-370-5p组相比,dsP21-555分别在T24和EJ细胞中p21 mRNA表达的差异均没有统计学意义（P>0.05）。通过RT-PCR得到了进一步验证。蛋白质印迹法提示,在T24和EJ细胞中,p21蛋白表达变化与p21 mRNA表达变化一致。与dsControl组相比,其余6对dsRNA均未能同时显著上调两种细胞系中p21WAF1/CIP基因的表达（P>0.05）。结论:外源性的dsP21-245和dsP21-555能显著促进膀胱癌细胞中p21WAF1/CIP1的高表达,且与相应的内源性miRNA激活p21WAF1/CIP1表达的能力无明显差异。第二部分外源性dsRNA通过激活p21蛋白的表达抑制膀胱癌细胞生长目的:通过转染外源性dsP21-555至膀胱癌细胞T24和EJ中,观察其能否抑制膀胱癌细胞的生长。方法:分别转染dsControl（阴性对照组）、miR-370-5p（阳性对照组）和dsP21-555（实验组）至膀胱癌细胞系T24和EJ。通过qPCR检测p21 mRNA和CDK4/6mRNA的表达变化。通过蛋白质印迹法检测p21蛋白和CDK4和CDK6蛋白的表达。通过流式细胞术检测三组中细胞周期分布。MTS法检测三组中细胞增殖能力。集落形成实验检测三组中单个细胞克隆增殖能力。结果:qPCR结果显示,与阴性对照组dsControl相比,dsP21-555分别促进T24和EJ细胞中p21 mRNA表达至2.46倍（P<0.01）和2.60倍（P<0.001）;与miR-370-5p相比,T24和EJ细胞中p21 mRNA表达的差异均无统计学意义（P>0.05）;与阴性对照组dsControl相比,dsP21-555组T24和EJ细胞中CDK4mRNA的表达下调至0.57倍（P<0.001）和0.46倍（P<0.01）,CDK6 mRNA的表达下调至0.61倍（P<0.01）和0.64倍（P<0.01）;与miR-370-5p相比,T24和EJ细胞中CDK4和CDK6 mRNA表达的差异均没有统计学意义（P>0.05）。蛋白质印迹法提示,p21和CDK4及CDK6蛋白表达变化与相应mRNA表达变化一致。FCM检测显示,与阴性对照组dsControl相比,转染miR-370-5p或dsP21-555后,处于G0/G1期的细胞比例明显上升,而处于S期和G2/M期的细胞比例下降,表明细胞周期被阻滞在G0/G1期。MTS法显示,与dsControl相比,转染miR-370-5p或dsP21-555后细胞增殖能力均明显减弱（P<0.05）,但与miR-370-5p相比,dsP21-555组细胞增殖能力无明显变化（P>0.05）。细胞集落形成实验显示,阳对对照组miR-370-5p和实验组dsP21-555形成的集落数数量均较阴性对照组dsControl少。结论:外源性dsP21-555能激活p21蛋白的表达,具有对膀胱癌细胞生长的抑制作用。