猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病。目前临床上广泛应用疫苗来对PEDV进行防控，但是预防效果并不佳，PED还是会时常发生，并给养猪业带来了巨大的经济损失，而单克隆抗体在疾病的诊断、治疗方面，具有特异性强、灵敏度高等优势，因此本试验应用常规的淋巴细胞杂交瘤技术，制备抗PEDV的单克隆抗体IgA，旨在研究特异性的IgA抗体对病毒增殖的影响，将为PED治疗药物的开发提供物质基础和理论依据。　　本研究将PEDV细胞毒经超速离心进行纯化，结果显示，纯化PEDV的浓度为4.802mg/ml。以纯化的PEDV作为包被抗原，通过一系列条件的优化，建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法。优化结果显示，最佳包被抗原浓度为6.0μg/mL;阴阳性血清最佳稀释度为1∶80，37℃作用1h;封闭液为含5％新生牛血清的PBST工作液;酶标抗体最佳稀释度为1∶2000，37℃作用45min;TMB显色时间为15min;抗体临界值为OD450nm≥0.267判定为阳性，OD450nm＜0.267判定为阴性。特异性试验显示，该方法与TGEV、RV、CSFV、PRRSV、PrV和PCV2阳性血清不发生交叉反应;重复性试验显示，批内和批间重复性试验的变异系数均值都小于10％。因此，该方法具有较好的特异性和重复性，为阳性杂交瘤细胞的筛选奠定了基础。　　将纯化的PEDV作为抗原，免疫雌性BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术和间接ELISA方法，制备并筛选了7株稳定分泌抗PEDV McAb的杂交瘤细胞，分别命名为3B5、5D10、5C3、1F8、2C7、4E3和2E7。经过单克隆抗体亚型的鉴定，5C3、4E3和2E7的抗体亚型均为IgMk;3B5、1F8抗体亚型均为IgG1k;5D10和2C7抗体亚型分别为IgG2ak和IgAk。秋水仙素法分析染色体数量，结果显示，7株杂交瘤细胞的染色体数量在95～103之间。IFA鉴定结果显示，7株McAb均能够与Vero细胞上增殖的PEDV特异性结合。ELISA检测结果显示，7株杂交瘤细胞的培养上清抗体效价分别为1∶320、1∶160、1∶160、1∶160、1∶80、1∶640、1∶320，相应的腹水效价分别为1∶104、1∶104、1∶103、1∶104、1∶102、1∶106、1∶105。将7株杂交瘤细胞连续传代30代，均能稳定的分泌抗体。　　鉴于本试验研究单克隆抗体IgA抗PEDV活性的影响，因此应用IgA类单克隆抗体纯化试剂盒对2C7株杂交瘤细胞制备的相应腹水进行纯化，纯化结果显示:IgA抗体浓度为3.063mg/ml。体外抗病毒研究采用细胞中性红染色法病毒中和实验，结果经SPSS软件分析显示，实验组与对照组的OD450nm值存在显著性差异(P＜0.05)，而且抗体的浓度越高差异越明显。体内抗病毒研究采用初生仔猪的预防性实验，通过口服不同剂量的IgA单克隆抗体，24h后给仔猪灌服PEDV细胞毒，应用荧光定量RT-PCR检测仔猪肠内容物中的病毒，结果显示，虽然不同剂量的实验组之间没有明显的差异，但是与病毒对照组相比，实验组中PEDV的阳性检出率明显下降。综上所述，本试验制备的抗PEDV的单克隆抗体IgA，在体外、体内均具有中和病毒的作用，因此，为今后研制PEDV的新型治疗药物提供了新的思路。