小鼠CD45~-/CD31~+肺侧群细胞诱导分化为血管内皮细胞及平滑肌细胞的研究

来源 :锦州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chen_chen1111
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目的肺器官是呼吸系统的一个重要组成部分,其功能是进行气体交换,保持肺功能处于良好的状态是维持生命的基本保障。肺部疾病在当今比较常见,而且非常严重。其中急性肺损伤(Acute Lung Injury,ALI)是肺部疾病中常见的一类疾病,其由多种致伤因素导致,会引起肺功能衰竭。肺部疾病严重影响人类健康。本实验选用CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞进行体外分化诱导,探讨CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞是否是血管内皮细胞及平滑肌细胞的祖细胞,进而为临床应用细胞疗法治疗肺部疾病提供新的策略。方法1、收集小鼠肺组织的细胞,流式细胞术分选CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞,免疫荧光检测其ABCG2的表达。2、RT-PCR检测分选的CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞的与血管内皮细胞相关的基因(Tie2、v WF)以及与平滑肌细胞相关的基因(SMA、α-SMT)的表达。3、对分选的CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞进行细胞克隆形成实验以及用流式细胞术检测该侧群细胞的细胞特性是否发生改变。4、用平滑肌细胞培养基SmGm-2及内皮细胞培养基EGM-2分别在体外培养CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞,应用免疫荧光技术检测α-SMT和v WF的表达。5、RT-PCR检测未诱导和诱导后的CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞的平滑肌细胞相关基因α-SMT和SMA,以及血管内皮细胞相关基因v WF的表达水平。结果1、流式细胞术成功分选出CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞,并且用免疫荧光染色检测到其ABCG2的表达。2、血管内皮细胞相关基因检测结果显示:该侧群细胞表达Tie2,不表达v WF;平滑肌细胞相关基因检测结果显示:该侧群细胞表达SMA,不表达α-SMT。3、CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞形成细胞克隆,流式细胞术的结果显示该侧群细胞的细胞特性未发生改变。4、免疫荧光染色的结果显示:经SmGm-2培养基分化诱导的细胞表达α-SMT;经EGM-2培养基分化诱导的细胞表达v WF。5、RT-PCR的结果显示经SmGm-2培养基分化诱导的细胞表达α-SMT、SMA;经EGM-2培养基分化诱导的细胞表达v WF。两者均不表达ABCG2。结论CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞可以在体外发育成血管内皮细胞和平滑肌细胞,提示CD45~-/CD31~+小鼠肺侧群细胞是血管内皮细胞和平滑肌细胞的祖细胞。
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