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随着社会经济发展,人们对石油资源的需求量越来越大。在石油勘探、开采、运输以及储存过程中都存在不同程度的泄漏,对土壤造成严重污染。在众多石油污染修复技术中微生物修复由于成本低、修复效果好、不易引起二次污染而得到了广泛应用。目前微生物修复技术存在的主要问题之一是缺少高效、广谱、稳定、适应性强的菌种以及对修复技术的深入研究。 本论文采取油浓度梯度升高法,从不同地区石油污染土样中分离出具有石油降解作用的菌株75株,选取其中两株高效稳定的石油降解菌 JC3-1、YM122,通过形态特征观察、结合细菌生理生化特征、16SrDNA序列分析初步确定JC3-1为嗜油不动杆菌(Acinetobacter oleivorans),YM122为鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)。 对菌株 JC3-1、YM122的生长特性进行了研究:菌株 JC3-1、YM122均在28h后进入生长稳定期。JC3-1在温度为20℃~40℃、pH5.0~9.0条件下生长良好,耐盐度为3%,且最适生长温度30℃~40℃,最适初始pH为9.0,最适生长盐浓度为0%;菌株 YM122在温度为20℃~50℃、pH5.0~9.0条件下生长良好,耐盐度为6%,最佳生长温度为40℃,最适初始pH为6.0,最适生长盐度1%。两株菌具有较强的环境适应性。 采用重量法对两株不动杆菌的石油降解率进行测定,在浓度为4000 mg/L石油培养基中生长15d,菌株 JC3-1对石油的降解率达42.15%,YM122的降解率达63.44%。 采用凃板计数法研究菌株对不同有机物的利用情况,菌株JC3-1能够利用一定浓度的正戊烷、正己烷、十六烷、十八烷、苯、甲苯、二甲苯、萘、邻苯二酚、芘;菌株 YM122能够利用一定浓度的十二烷、十六烷、十八烷、邻苯二酚。通过对菌株十六烷的粘附测定发现:菌株 JC3-1对十六烷的粘附率为96.57%,YM122对十六烷的粘附率可达42.56%,远高于大肠杆菌(E. co i l)3.10%。 PCR扩增检测到菌株 JC3-1与 YM122均具有烷烃单加氧酶(alkane monooxygenase)、芳烃双加氧酶(aromatic-ring-hydroxylating dioxygenases)、联苯双加氧酶(b ip henyl d ioxygenase)、甲苯双加氧酶(to luene d ioxyge nase)、邻苯二酚双加氧酶(catechol-2,3-dioxygenase)、萘双加氧酶(naphthalene dioxygenase)与石油降解相关的酶。对芳烃双加氧酶基因进行了克隆和序列分析。