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钙依赖型蛋白酶calpain可以以多种组成粘附斑的分子元件为底物而将其裂解,使粘附斑解体,因而可能是诱导粘附斑解体的主要原因。分别使用上皮生长因子(Epidemal Growth Factor, EGF)或蛋白激酶A (protein kinase A, PKA)激活或抑制calpain 2的蛋白水解酶活性,通过免疫荧光和Western Blot等技术来研究calpain 2对由paxillin和vinculin等几种细胞骨架蛋白构成的粘附斑的裂解效果。证明calpain 2水解蛋白是导致细胞尾部粘附斑水解的主要原因。在生理Ca2+浓度条件下,此步骤可受EGF和PKA调控。免疫荧光证实在EGF激活条件下,粘附斑水解的程度增强,但在数目仅表现为减少,减少程度并不与诱导时间呈对应关系；而粘附斑大小整体下降,且下降程度与时间呈对应关系。在PKA抑制条件下,抑制程度随PKA浓度增加增强,其中5ug/ml及以上浓度抑制作用明显。Western Blot结果显示在EGF或PKA激活或抑制条件下paxillin和vinculin在细胞内的含量均无明显变化,表明Calpain依赖于通过调节talin蛋白的水解来调节paxillin、vinculin等其它组成粘附斑的细胞骨架蛋白水解。因此Calpain对talin蛋白水解的调节,对粘附斑解体至关重要。已确定talin的calpain酶切位点为其第432位的亮氨酸(Leu432),其第144位苏氨酸、第150位苏氨酸和第446位色氨酸(Thr144、Thr150、Ser446)为高化学计算磷酸化位点。设计合成野生型talin头部基因片段,利用重组PCR(recombinant PCR)引入点突变的方法获得432(Leu→Gly)酶切位点突变型和144(Thr→Ala)/150(Thr→Ala)、446(Ser→Ala)2种不同磷酸化位点突变型,一共3种突变型talin头部基因片段,并构建外源重组质粒。使用构建的外源重组质粒成功转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞。为进一步的研究打下基础。