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人巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染率极高。在大多数免疫功能正常个体不表现临床症状;但在免疫抑制人群HCMV原发或继发感染可导致严重的后果甚至是致死性疾病。随着特异性免疫治疗技术的出现和预防性抗病毒药物的应用,HCMV所致疾病的发生率和死亡率大大减少。因此,研究和开发HCMV感染实验室诊断及其特异性预防和治疗制剂对于其感染早期的预测、监控及采取特异性预防和治疗措施,减少由HCVM先天性感染导致的胎儿畸型及严重的智力障碍、提高器官和血干细胞移植等患者的成功率均具有重要的意义。基于这一目的,本课题主要进行以下三方面的研究。 一.HCMV pp150原核表达及其抗原性分析 研究背景 目前,检测血清特异性IgM是临床诊断HCMV活动性感染最常用的方法。其ELISA诊断试剂盒所采用的抗原多来自于经人胚肺二倍体细胞培养的HCMV全病毒裂解物。由于HCMV与单纯疱疹病毒(HSV)及人细胞膜抗原成份有交叉;且细胞培养成份复杂,抗原难以标准化,常导致血清学检测结果不一致。因此,制备基因工程抗原,以替代全病毒抗原用于血清学诊断,有利于提高HCMV血清学诊断的特异性及试剂的标准化。大量的研究证明,HCMV特异性IgM是其急性感染的最佳血清标志物,而病毒的pp150羧基端是特异性IgM的主要靶表位。本研究旨在利用大肠杆菌表达pp150蛋白,以进一步探讨其在HCMV感染的实验室诊断中的应用价值。 目的 构建人巨细胞病毒(HCMV) pp150的原核表达克隆,制备基因工程抗原以用于活动性HCMV感染的血清学诊断。 方法 设计了扩增HCMV AD169株pp150(羧基末端编码840-1048aa)基因片段的PCR引物。PCR扩增目的基因片段;将获得的目的基因分别与原核表