MACS分选人前列腺癌类干细胞的初步鉴定

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目的:通过免疫磁珠细胞分选(Magnetic bead cell sorting, MACS)方法从人前列腺癌细胞系PC-3中分选CD133~+/CD44~+干细胞并初步鉴定。方法:运用流式细胞仪分别检测MACS分选前后PC-3细胞膜上CD133和CD44表达情况;观察无血清培养基培养细胞成球情况,免疫荧光检测CD133/CD44表达情况;比较细胞在分选前后的形态学、增殖能力方面的差异;免疫组化和western blot检测诱导分化前后前列腺酸性磷酸酶(Prostatic acid phosphatase, PAP)蛋白情况。结果:流式细胞术检测PC-3细胞CD133和CD44的阳性表达分别是(1.33±0.05)%和(0.87±0.06)%,而MACS分选后分别为(84.82±0.07)%和(99.91±0.03)%;免疫荧光检测CD133~+/CD44~+细胞培养后继续呈阳性表达;CD133~+/CD44~+细胞增殖能力高于PC-3细胞(t=11.0, P=0.008)以及高于诱导后的CD133~+/CD44~+细胞(t=40.1, P=0.001);CD133~+/CD44~+细胞经过转化生长因子(Transforming growth factor-beta, TGF-β)诱导后免疫组化和western blot检测PAP表达呈阳性,而未诱导的CD133~+/CD44~+细胞表达呈阴性。结论:MACS从PC-3细胞株中分选的CD133~+/CD44~+干细胞经过初步功能性鉴定具有干细胞的某些特性,可为前列腺癌干细胞的进一步功能性和生物学性研究探索奠定基础。
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