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背景: 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种源于人类肝细胞恶变而形成的恶性肿瘤,恶性程度极高。其发病率与死亡率在全球范围内都都高居前列,中国的肝癌发病率与死亡率在全世界范围内均排名首位,而且发病率逐年呈上升趋势,肝癌患者的总体生存率仅为5%[1]。尽管近年来肝癌的基础和临床研究都取得了不少进展,但目前仍缺乏有效的肝癌早期诊断方法。肝癌治疗方法以早期手术切除为主,同时辅以介入治疗、消融治疗及药物治疗等,但都具有疗效不确定、治疗后易复发等缺点,这与肝癌发生发展的基因分子生物学机制未明有关。发现并深入研究肝癌恶性生物学行为的新基因,有助于准确揭示肝癌发生发展的分子机制,为肝癌的早期诊断和治疗提供新的思路及治疗靶点,对进一步提高肝癌的诊治水平及改善预后有着重要的现实意义。以往的研究主要集中在对肝癌发生发展过程中起关键作用的基因和蛋白上,近年来大量的研究表明微小RNA分子(miRNA)对肝癌的发生发展具有新的表达调控模式。 MicroRNA(miRNA)是一种非编码小分子RNA,它广泛存在于真核生物中、长度约19~25nt的内源性单链非编码RNA。它是通过完全或不完全碱基配对的方式与靶RNA的3′端的非编码区结合,在转录后水平调控mRNA的翻译,从而参与对靶基因功能的调节,并进而参与细胞的发育、增殖、分化、凋亡等多种生物学过程。根据研究显示miRNA在多种肿瘤中异常表达,与肿瘤的发生发展关系密切[2-6],在人体内起着着“癌基因”或“抑癌基因”的作用[7]。大量研究证据表明miRNA在肝癌的进展中发挥着重要作用,并且直接参与了肝癌细胞的分化、凋亡、侵袭和远处转移的过程。miR-145是近年来发现的一种抑癌基因,在许多肿瘤如乳腺癌、肺癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌等中呈低表达[8]。那么miR-145在肝细胞癌中是否有异常表达?异常表达是否对肝癌的发生、发展起到有影响呢?这在国内外鲜有报道。故本文将以miR-145作为研究对象,探究其对肝癌细胞生物学特性的影响,以期探明miR-145在肝癌发生发展中的影响,为肝癌的早期诊断和治疗提供新的思路和方法。 目的: 探究miR-145对肝癌细胞的增殖、周期、侵袭、转移及肿瘤生长等生物学行为的影响,以期明确其在肝癌的发生、发展中所起的作用。 方法: 1.运用RT-PCR技术检测肝癌组织及其癌旁组织中miR-145的表达差异。再继续运用RT-PCR技术检测人正常肝细胞株(LO2)和肝癌细胞株(MHCC-97H、SMMC7721、BEL-7402、Huh-7)中miR-145表达量,并筛选出合适的肝癌细胞株。 2.构建带有GFP荧光的miR-145过表达基因、miR-145抑制基因以及空白基因的慢病毒,转染至合适的肝癌细胞中,筛选稳定表达的病毒转染细胞株。并运用RT-PCR技术检测验证转染后肝癌细胞中的miR-145表达量 3.分别运用CCK8、流式细胞术和TransWell小室、细胞划痕试验检测过表达及去表达miR-145对肝癌细胞增殖、细胞周期和侵袭、迁移能力的影响。 4.在裸鼠皮下接种过表达miR-145的肝癌细胞,对比空白对照组,观察肿瘤的生长情况。 结果: 1.肝癌组织中miR-145的表达量明显低于其对应的癌旁组织。肝癌细胞系(SMMC-7721,Huh-7,BEL-7402,MHCC-97H)中miR-145的表达量都低于正常肝细胞(LO2),其中SMMC-7721中含量最高,MHCC-97H细胞最低,。 2.通过转染过表达或抑制表达miR-145慢病毒的肝癌细胞其体内miR-145明显增高或降低,并能稳定表达。 3.相对于对照组,转染了过表达基因的实验组显著抑制肝癌细胞增殖能力、侵袭和迁移能力。反之,抑制表达miR-145实验组的细胞增殖、侵袭、迁移能力显著上升。而改变miR-145的表达对细胞周期G1期、S期、G2/M期的增殖指数无明显影响。 4.在裸鼠皮下接种过表达miR-145的肝癌细胞成瘤速度明显慢于空白对照组。 结论: 1.miR-145可抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,但对肝癌细胞周期无明显影响。 2.miR-145可在体内抑制肝癌细胞的生长。