MiR-145对肝癌细胞增殖侵袭转移能力的影响研究

来源 :广州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wain155
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
背景:  肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种源于人类肝细胞恶变而形成的恶性肿瘤,恶性程度极高。其发病率与死亡率在全球范围内都都高居前列,中国的肝癌发病率与死亡率在全世界范围内均排名首位,而且发病率逐年呈上升趋势,肝癌患者的总体生存率仅为5%[1]。尽管近年来肝癌的基础和临床研究都取得了不少进展,但目前仍缺乏有效的肝癌早期诊断方法。肝癌治疗方法以早期手术切除为主,同时辅以介入治疗、消融治疗及药物治疗等,但都具有疗效不确定、治疗后易复发等缺点,这与肝癌发生发展的基因分子生物学机制未明有关。发现并深入研究肝癌恶性生物学行为的新基因,有助于准确揭示肝癌发生发展的分子机制,为肝癌的早期诊断和治疗提供新的思路及治疗靶点,对进一步提高肝癌的诊治水平及改善预后有着重要的现实意义。以往的研究主要集中在对肝癌发生发展过程中起关键作用的基因和蛋白上,近年来大量的研究表明微小RNA分子(miRNA)对肝癌的发生发展具有新的表达调控模式。  MicroRNA(miRNA)是一种非编码小分子RNA,它广泛存在于真核生物中、长度约19~25nt的内源性单链非编码RNA。它是通过完全或不完全碱基配对的方式与靶RNA的3′端的非编码区结合,在转录后水平调控mRNA的翻译,从而参与对靶基因功能的调节,并进而参与细胞的发育、增殖、分化、凋亡等多种生物学过程。根据研究显示miRNA在多种肿瘤中异常表达,与肿瘤的发生发展关系密切[2-6],在人体内起着着“癌基因”或“抑癌基因”的作用[7]。大量研究证据表明miRNA在肝癌的进展中发挥着重要作用,并且直接参与了肝癌细胞的分化、凋亡、侵袭和远处转移的过程。miR-145是近年来发现的一种抑癌基因,在许多肿瘤如乳腺癌、肺癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌等中呈低表达[8]。那么miR-145在肝细胞癌中是否有异常表达?异常表达是否对肝癌的发生、发展起到有影响呢?这在国内外鲜有报道。故本文将以miR-145作为研究对象,探究其对肝癌细胞生物学特性的影响,以期探明miR-145在肝癌发生发展中的影响,为肝癌的早期诊断和治疗提供新的思路和方法。  目的:  探究miR-145对肝癌细胞的增殖、周期、侵袭、转移及肿瘤生长等生物学行为的影响,以期明确其在肝癌的发生、发展中所起的作用。  方法:  1.运用RT-PCR技术检测肝癌组织及其癌旁组织中miR-145的表达差异。再继续运用RT-PCR技术检测人正常肝细胞株(LO2)和肝癌细胞株(MHCC-97H、SMMC7721、BEL-7402、Huh-7)中miR-145表达量,并筛选出合适的肝癌细胞株。  2.构建带有GFP荧光的miR-145过表达基因、miR-145抑制基因以及空白基因的慢病毒,转染至合适的肝癌细胞中,筛选稳定表达的病毒转染细胞株。并运用RT-PCR技术检测验证转染后肝癌细胞中的miR-145表达量  3.分别运用CCK8、流式细胞术和TransWell小室、细胞划痕试验检测过表达及去表达miR-145对肝癌细胞增殖、细胞周期和侵袭、迁移能力的影响。  4.在裸鼠皮下接种过表达miR-145的肝癌细胞,对比空白对照组,观察肿瘤的生长情况。  结果:  1.肝癌组织中miR-145的表达量明显低于其对应的癌旁组织。肝癌细胞系(SMMC-7721,Huh-7,BEL-7402,MHCC-97H)中miR-145的表达量都低于正常肝细胞(LO2),其中SMMC-7721中含量最高,MHCC-97H细胞最低,。  2.通过转染过表达或抑制表达miR-145慢病毒的肝癌细胞其体内miR-145明显增高或降低,并能稳定表达。  3.相对于对照组,转染了过表达基因的实验组显著抑制肝癌细胞增殖能力、侵袭和迁移能力。反之,抑制表达miR-145实验组的细胞增殖、侵袭、迁移能力显著上升。而改变miR-145的表达对细胞周期G1期、S期、G2/M期的增殖指数无明显影响。  4.在裸鼠皮下接种过表达miR-145的肝癌细胞成瘤速度明显慢于空白对照组。  结论:  1.miR-145可抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,但对肝癌细胞周期无明显影响。  2.miR-145可在体内抑制肝癌细胞的生长。
其他文献
目的:  通过检测Pim-3及其下游因子Bad蛋白的磷酸化形式p-Bad在结直肠癌癌组织和癌旁组织中的表达,探讨Pim-3和p-Bad在结直肠癌发生、发展中的作用以及二者的相关性。  方
目的:舌下特异性免疫治疗(Sublingual Immunotherapy,SLIT)是近年来WHO提倡的针对过敏性哮喘和变应性鼻炎的新疗法,本课题采用“粉尘螨滴剂”对儿童螨性过敏性哮喘和变应性鼻炎进
目前,初中生厌学的现象比较严重,它制约了教学质量的提高和教育目标的实现。就政治学科说,很多学生不感兴趣,造成学生对政治产生厌学是多种因素的,既有外部原因,也有学生内部原因,还有社会大环境的影响。究其原因,发现“厌学”有以下几个方面:  一、学习目的不明确,态度不端正  学习的目的和态度是直接推动人的学习内部原因。目的和态度与学习效果是紧密相联,互为因果,不同的学习目的和态度会产生不同的学习效果,它
【摘 要】探讨了在计算机课程的教学过程中,上机实习课的重要性,围绕如何提高上机实习课质量的问题,结合教学实践,总结了一些教学经验和方法。  【关键词】计算机课程 上机实习课 责任心 引导 辅导    随着计算机应用的日益普及,计算机的教学走进了学校。高等学校、中职学校有计算机专业课程教学,各中小学也开设了计算机基础普及课程。计算机课程重点是培养学生的实际操作能力,虽然教学中既有理论课,
一、工作目标与思路  广东医学院是广东省最大的临床医生培养基地,现有临床专业学生9400多人。近年来,为全面贯彻落实国家教育方针和新医改方案,适应建设幸福广东的需要,我校遵循临床医学的专业特色和教育特性,围绕打造“四得”(下得去、留得住、用得上、干得好)医生孵化基地的目标,开展了以“基础”“ 台阶”“ 铺路”为主要内涵的校园文化建设“三大工程”,形成了融“三需”(学生所需、社会所需、职业所需)为一
作为一个具有传统美德的文明古国,我国历来重视道德修养和文明礼貌,自古就有 “施人慎勿念,受施慎勿忘”、“投之以桃、报之以李”等感恩古训和典故;在西方文化中感恩也是一种被高度称赞的人类特质,在《圣经》中感恩作为对上帝的慷慨的强化物而出现。感恩不仅是人之所以为人的重要道德基石,也是社会秩序良性运行的基础。  一、感恩团辅的简介  感恩是一种积极品质、能力,也是一种心理活动,它体现为人的知、情、意、行相
【摘 要】随着新的教育教学体制改革,新的教育体制和教学背景下,对于课堂教学也有了新的要求,这就需要我们加强相关的研究和分析,从而科学的把握。本文主要从高中化学实验探究的相关问题出发,同时结合新课程的相关要求展开分析和探讨。  【关键词】新课程 化学实验 教学探究 分析    对于课堂教学来说,进行科学有效的实验探究和分析具有重要的意义,而且随着新课程改革和发展的要求,进行实验探究的教学
【摘 要】文体教学现已融入作文教学血液里,在其指导下作文教学获得方兴未艾的发展。本文对作文文体的定义、分类进行系统爬梳,初步感知作文文体内涵演变的深层原因,回顾研究传统,展望未来研究方向,拓展进一步研究的视野。  【关键词】定义分类 文体教学 研究传统    一、引言  中国是历来重视文体的国度,早在刘勰的《文心雕龙》、徐师曾的《文体明辨》,对文体就有了高屋建瓴的见解。但追及文体教学还得回