论文部分内容阅读
目的明确miR-155与血管紧张素Ⅱ受体1型(AGTR1)在野百合碱诱导的肺动脉高压模型大鼠肺动脉中的表达情况,探讨在大鼠肺动脉平滑肌细胞中miR-155能否通过调控AGTR1表达进而对肺动脉平滑肌细胞的增殖产生影响。方法选取50只周龄为8-10w的健康雄性SD大鼠,按照随机数字表法将大鼠分为5组:对照组(生理盐水)、4d模型组、7d模型组、14d模型组、21d模型组,对照组给予等量生理盐水腹腔注射处理,其余4组按照每公斤体重50mg剂量腹腔注射野百合碱(MCT)诱导建立大鼠肺动脉高压模型。对照组、4组模型组分别在第0、4、7、14、21d检测大鼠右心室内压(mRVP)、体循环动脉压(SAP),完成检测后放血处死大鼠,取心脏计算右室质量指数(RVMI)、取肺组织行苏木素-尹红(HE)染色观察各组肺动脉形态,Real-time PCR检测肺动脉组织中miR-155和AGTR1的基因表达,Western blot检测肺动脉组织中AGTR1蛋白的表达量。体外培养大鼠肺动脉平滑肌(PASMCs)细胞,取状态良好的细胞进行实验,给予以下处理并分4组:空白对照组(等量生理盐水)、吡咯野百合碱(MCTP)组、吡咯野百合碱(MCTP)+转染空白载体(miR-155-NC)组、吡咯野百合碱(MCTP)+过表达miR-155(miR-155-mimic)组。生物信息学方法预测miR-155与AGTR1的靶标关系,MTT法检测细胞生长增殖情况,荧光素酶报告分析miR-155对AGTR1的调控关系,qPCR检测miR-155与AGTR1的基因表达,Western blot检测AGTR1的蛋白表达。结果与对照组相比,14d、21d模型组大鼠右心室内压(mRVP)与右室质量指数(RVMI)明显升高(P<0.05),而各组体循环压力无明显差异(P>0.05);HE染色示随着造模时间进展,肺动脉中膜逐渐增厚、出现血管重构现象,在21d肺动脉管腔明显狭窄、中膜肥厚;与正常大鼠对比,miR-155在野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺动脉组织中呈低表达,而AGTR1呈高表达(P<0.05);且miR-155与AGTR1的表达量出现时间相关性的负性关系。荧光素酶报告证实在肺动脉平滑肌细胞中miR-155能靶向结合AGTR1基因造成荧光素酶水平下降(P<0.05);与空白对照组相比,MCTP处理大鼠肺动脉平滑肌细胞后,细胞增殖能力增加、miR-155表达量降低而AGTR1的表达上升(P<0.05);对大鼠肺动脉平滑肌细胞进行miR-155过表达后,检测到miR-155表达量增加,且AGTR1基因与蛋白表达均下降,细胞增殖活性下降(P<0.05)。结论MCT能诱导建立肺动脉高压大鼠模型,miR-155与AGTR1在该模型中的表达呈现出负性关系,且这两者的表达量与反应肺高压的严重程度参数指标有相关性。在肺动脉平滑肌细胞中miR-155能通过负性调控AGTR1的表达来影响肺动脉平滑肌细胞增殖能力。