猪链球菌不同血清型抗血清的制备及在病原流行病学调查中的应用

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猪链球菌是猪群中一种常见的条件致病菌,在世界范围内分布十分广泛,革兰氏染色阳性,血平板上呈α溶血,分为35个血清型。细菌通常定居在猪的上呼吸道(特别是扁桃体和鼻腔)、生殖道或消化道,严重时可引起肺炎、脑膜炎、败血症以及关节炎。人感染后也可出现脑膜炎、败血症、关节炎、肺炎、心内脑炎、眼内炎以及腹膜炎等严重症状,1968年丹麦第一次报道猪链球菌引发的脑膜炎病例,随后,许多国家和地区又相继出现过人感染猪链球菌的报道。我国每年也因猪链球菌遭受重大的经济损失,甚至还出现过两次严重的公共卫生事件。本文对我国部分地区的猪链球菌流行情况进行研究,从而为我国猪链球菌的防治提供依据。1.猪链球菌抗血清的制备和初步应用:用猪链球菌35个血清型的标准菌株制备抗原,经静脉免疫清洁级的新西兰白兔,免疫结束后采集血液、分离血清,对存在交叉反应的血清进行吸附处理,经试管凝集方法测定35个血清型抗血清的效价均高于1:32。对12株国内猪链球菌分离株的凝集试验表明:抗血清只与相同血清型的菌株存在凝集反应,可以区分出PCR方法无法鉴别的1型和14型以及2型和1/2型,并在国内首次鉴定出猪链球菌13型。2.中国部分省份猪链球菌的流行病学调查:2006-2007年,从重庆、浙江23个区县共采集1418份样品,用针对谷氨酸脱氢酶(gdh)基因的PCR方法检测,共得到229株猪链球菌,其中2006年重庆的1360份样品中检出222株猪链球菌;2007年重庆的20份样品中检出2株猪链球菌,浙江的20份样品中分离到5株猪链球菌。二重PCR检测结果显示:229株猪链球菌中共有18株可以确定血清型,其中1/2型2株、2型7株、7型4株、9型5株。3.中国部分省份猪链球菌分离株的鉴定:本试验在PCR(针对gdh基因)鉴定的基础上,用试管凝集法对重庆、杭州等地的26株猪链球菌分离株进行定型,并用多位点序列分型技术研究其中的23株,结果显示:中国重庆地区流行的猪链球菌主要是1/2、2、7、9以及15、16等血清型,杭州主要流行猪链球菌2型和7型;进化树显示23株猪链球菌分离株属于14个不同的ST型。
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