[目的]从新建立的宣威肺腺癌细胞系中,应用流式细胞术从中分选出SP细胞后克隆化培养,得到2个细胞形态不同的细胞亚群SPs,SPcm,分别进行克隆化培养得到形态有差异的四个细胞亚群SPs-C11,SPs-E8,SPcm-G10,SPcm-B10,鉴定其干细胞生物学特性,比较各细胞亚群是否存在差异。[方法]采用流式细胞术从宣威肺腺癌细胞系中分选出SP细胞,将SP细胞克隆化培养,获得2个细胞形态不同、恶性生物学行为和干细胞性质不同的细胞亚群,命名为SPs和SPcm,分别对这2个细胞亚群进行克隆化培养,从Sps亚群中分选出细胞呈长梭形的SPs-C11细胞和呈不规则多边形的SPs-E8细胞,从SPcm亚群中分选出细胞呈不规则多边形的SPcm-G10细胞和呈长梭形的SPcm-B10细胞,以新分选的4组细胞亚群进行对比研究：(1)细胞形态学观察：光镜观察细胞形态,透射电镜观察细胞超微结构。(2)细胞分裂指数测定：采用细胞爬片Giemsa染色后计算细胞分裂指数。(3)细胞生长曲线：将细胞制成105/ml单细胞悬液分别接种于96孔板,每孔200μl,边缘孔用无菌PBS填充,移入37℃细胞培养箱中培养,在24h、48h、72h、96h、120h、144h、168h各取一块96孔板采用MTT法测OA值,绘制细胞生长曲线。(4)软琼脂克隆形成实验：采用双层软琼脂培养法计算克隆形成率,克隆形成率(‰)=(克隆数/接种细胞数)×1000%0。(5)细胞周期分布和DNA倍体分析：采用流式细胞术检测细胞周期和DNA倍体。(6)细胞侵袭能力检测：体外侵袭实验采用Transwell小室法检测细胞侵袭能力。[结果](1)细胞形态：SPs-C11,SPs-E8,SPcm-G10,SPcm-B10细胞亚群均属中分化的肺腺癌细胞,具有恶性肿瘤细胞的形态特征,即：细胞异形性大,细胞大小不等,形态多样,呈长梭形或不规则多边形,细胞折光性减弱,细胞核大,核浆比增大,可见双核,多核,巨核及奇异形核,核内染色加深,染色质呈粗颗粒状,分布不均匀,常堆积在核膜下,使核膜增厚,核仁肥大,出现不对称或多极核分裂等病理性核分裂现象,细胞可排列呈腺样结构,电镜下细胞超微结构改变表现为细胞器较正常细胞减少,但线粒体数量增多,形态异常,而粗面内质网肿胀,形态异常。(2)细胞分裂指数：SPs-C11,SPs-E8两组细胞亚群细胞分裂指数均大于SPcm-G10,SPcm-B10细胞亚群,提示SPs亚群的两组细胞其生长,分裂繁殖能力均大于SPcm亚群的两组细胞亚群。(3)细胞生长曲线：SPs亚群中两个细胞亚群C11及E8细胞生长速度高于SPcm亚群的G10及B10两细胞亚群。(4)软琼脂克隆形成实验：四组细胞亚群均有克隆形成,克隆形成率：SPs-C11> SPs-E8> SPcm-G10>SPcm-B10,且SPs-C11,SPs-E8两组克隆形成率大于SPcm-G10, SPcm-B10细胞亚群,p<0.05,说明SPs亚群C11及E8分裂增殖能力及转移能力高于SPcm亚群的G10及B10两细胞亚群。(5)细胞周期分布和DNA倍体分析：四组细胞亚群均为异倍体肿瘤,SPS-C11, SPS-E8核DNA含量大于SPCM-G10及SPCM-B10两组细胞。(6)细胞侵袭能力：SPs-C11,SPs-E8两组穿过ECM胶聚碳酸酯膜的细胞数OD值大于SPcm-G10, SPcm-B10细胞亚群,SPs亚群中两个细胞亚群C11及E8细胞侵袭能力高于SPcm亚群的G10及B10两细胞亚群。[结论](1)宣威肺腺癌细胞系中分选出的SPs-C11, SPs-E8, SPcm-G10, SPcm-B10四组细胞亚群均属于中分化肺腺癌细胞,具有腺癌细胞的形态结构及生物学特性。(2) SPs-C11,SPs-E8两组细胞亚群的在生长速度、分裂增殖能力、转移侵袭能力及细胞恶性程度均高于SPcm-G10, SPcm-B10两细胞亚群。