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本文主要从以下两个部分展开论述: 第一部分 超长扫描深度OCT观察大鼠后发障形成和晶状体再生 目的:用超长扫描深度光学断层扫描(UL-OCT)观察大鼠晶状体囊外摘除(ECLE)术后后发障(PCO)形成和晶状体再生。 方法:S-D大鼠共42只。其中34只为实验组,行右眼ECLE术;8只为空白对照组,不行手术。实验组于术后即刻、1天、3天、1周、2周、1个月、2个月及3个月时行裂隙灯和OCT检查。每次检查后,取3只大鼠眼球行组织学检查。剩余10只实验组大鼠连续观察至术后3月,用OCT测量并分析其术后1、2、3个月再生晶状体的厚度。空白对照组于术后3个月行OCT检查正常晶状体厚度。 结果:UL-OCT、裂隙灯和组织学检查均可于术后3天观察到后发障的形成。术后1个月内晶状体再生主要位于周边区域,此后向撕囊区填充。UL-OCT、裂隙灯和组织学检查之间有较好的一致性。术后1、2、3个月时测量再生晶状体厚度分别为1185±155μm,1863±259μm和1948±295μm。晶状体再生速度于术后2个月内最快,之后开始减缓。术后3个月时再生晶状体的形状和透明度均接近正常晶状体,但体积明显小于正常晶状体。 结论:UL-OCT是一种可用来观察和分析大鼠PCO形成和晶状体再生的快速的、非侵入性的、定量的图像检测技术。 第二部 分晶状体干细胞的标记物探索与定位 目的:通过探索在体的晶状体干细胞特异性的标记物,定位潜在的晶状体干细胞。 方法:取出生后2天、4周、8周及16周的SD大鼠各三只,处死采集研究标本后行,经过常规处理,制成5μm的石蜡切片。HE染色后,行不同鼠龄的晶状体上皮细胞计数。同时使用免疫组化和免疫荧光的方法,检测晶状体上皮细胞的增殖(Ki-67和MCM2抗体)与凋亡(caspase-3激活型抗体),并探索潜在的晶状体特异性干细胞标记物的表达与分布(sox-2、oct-4、nestin和cd133)。 结果:出生2天时大鼠晶状体上皮细胞增殖活跃,随着鼠龄增长增殖活动逐渐下降,至16周龄时,晶状体的增殖区域主要位于生发区的上皮细胞。在出生后16周内的大鼠正常晶状体中,较少发生凋亡。晶状体上皮细胞的数量在出生后增长,至8周时,细胞数量趋于稳定。干细胞标记物的研究中,检测到大鼠晶状体上皮细胞有nestin的表达。在出生时,全晶状体上皮的上皮细胞有nestin的阳性表达,而随着鼠龄增长, nestin的阳性区域逐渐向前部中央区缩小。在8周时,生发区的nestin表达减弱;至16周时,仅在晶状体中央区上皮有nestin表达。而其他的干细胞标记物sox-2,oct-4和cd133均未在出生后的晶状体中检测到。结论:nestin可能是潜在晶状体干细胞特异性的标记物,其标记的晶状体干细胞分布位置随着年龄的增长而由周边逐渐趋向晶状体上皮的中央区,该区域是潜在干细胞巢的位置。