Bs-0728菌株室内发酵条件及其对苹果再植病害的防治作用研究

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苹果再植病害(Apple Replant Disease,ARD)又名连作障碍,是世界范围内苹果产区的一个难题。目前,使用杀菌剂或熏蒸消毒处理重茬土是对再植病害的重要防治方法,但是化学处理具有高毒性,污染环境,并且危害人类健康等缺点。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)繁殖速度快、易于定殖、抗菌谱广,并且其芽孢抗逆性强、易于存活,是理想的生防制剂。枯草芽孢杆菌Bs-0728菌株是本研究组在苹果根部重茬土壤中分离到的一株对19种苹果再植病害病原菌都具有拮抗作用的生防细菌。为了提高培养基中Bs-0728的芽孢数量,本研究利用单因素试验和正交试验相结合的方法,对Bs-0728菌株芽孢的最适培养基和培养条件进行了优化。结果表明:Bs-0728菌株芽孢发酵的最适液体培养基为:玉米粉1%,花生饼粉1%,磷酸二氢钠0.4%+磷酸氢二钠0.4%,最适培养条件为:初始pH值7.2-7.5,Mn2+浓度200mg/L。在最优条件下发酵7d,Bs-0728菌株发酵液中的芽孢数量达到4.92×1014cfu/mL。Bs-0728菌株芽孢固体发酵的最优培养基成分为:玉米粉100g/kg,花生饼粉50g/kg,氯化钙8g/kg,最佳培养条件为:料水比2:5,温度28~30℃。采用室内试验和田间试验相结合的方法,研究了枯草芽孢杆菌Bs-0728对苹果再植病害病原菌的抑制作用及对苹果再植病害的防治效果。室内试验结果表明,Bs-0728菌株对苹果再植病害病原菌有拮抗作用,同时能促进海棠胚根的伸长及胚根抗病能力的增强,使海棠胚根的发病率从13.33%降低到6.67%;两年重复试验结果表明,Bs-0728菌株对防治盆栽海棠幼苗和田间苹果树再植病害都有显著的作用;通过施用Bs-0728菌株,盆栽海棠幼苗的株高和根长分别比重茬土处理提高了22.6%和19.5%;干重提高了96.2%;田间苹果树的茎粗增加量提高了66.1%。田间定殖动态检测结果表明,Bs-0728标记菌株能成功定殖于苹果根际土壤中达120d。
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