拮抗细菌的分离鉴定及其对苦瓜枯萎病生防潜力的研究

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由尖孢镰刀菌苦瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.momordiicae)引起的苦瓜枯萎病(bitter gourd wilt)是一种广泛分布在世界各苦瓜产区,严重影响苦瓜产量的土传病害。山东省是我国北方地区设施苦瓜栽培大省,由于连年种植,苦瓜枯萎病的发生呈逐年扩大、加重的趋势,已成为我省苦瓜优质高产的重要制约因素。为了解山东地区苦瓜枯萎病的发生情况和筛选苦瓜枯萎病拮抗菌株,本研究对采自山东寿光、肥城等苦瓜枯萎病高发区的样品,分别进行了病原菌的分离纯化、致病性测定、菌种的形态学鉴定和苦瓜枯萎病拮抗细菌的分离纯化、拮抗活性测定、菌种的分子生物学鉴定及其防病机理的初步研究。试验结果如下:通过对苦瓜枯萎病高发病区采集到的病株样品进行分离纯化,获得菌株SG-15,根据其菌落形态和分生孢子特征,鉴定该菌株为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schl.);根据温室盆栽和大田苦瓜致病性试验结果,确定该菌株为苦瓜枯萎病致病菌株。采用土壤稀释涂布法对采集的健康苦瓜根际土壤进行分离纯化,并通过平皿拮抗试验对分离得到的菌株进行初步筛选,共获得7株对苦瓜枯萎病病原菌具有明显拮抗作用的细菌菌株,其中1株在温室防病试验中对苦瓜枯萎病表现出显著防效,其防治效果达到60%。经16S rDNA和gyrB序列比对分析,该细菌菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),菌株编号记为 SK2。对解淀粉芽孢杆菌SK2菌株的防病机理做了初步研究。结果表明:SK2可明显促进苦瓜种子胚根的生长,经SK2菌悬液浸泡的苦瓜种子,其胚根长度比对照组增加30%左右。SK2菌株在植株根际定殖的检测结果表明:SK2菌株是一株植物根际优势微生物,可以在苦瓜根际很好定殖。在接种病原菌后的第2、4、6、8、10、12 d对处理组和对照组植株的防御酶活性进行了检测,结果表明:添加SK2菌悬液处理组苦瓜植株内多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解胺酶(PAL)和过氧化物酶(POD)的酶活性均高于对照组的酶活性。
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