Aspirin在结肠癌中对顺铂的增敏作用及其分子机制的研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:da330136324
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目的:  结肠癌是全球最常见的消化系统恶性肿瘤。外科手术和放化疗是其主要治疗手段。Cisplatin(顺铂)是最为有效的一种实体瘤化疗药物。然而,其显著毒副作用和耐药限制了顺铂的临床使用。Aspirin(阿司匹林)和其他非甾体抗炎药已被证实可以作为包括结肠癌在内的许多癌症的化学预防和治疗剂使用。为探寻Aspirin是否可以作为辅助药物协同顺铂Cisplatin抑制结肠癌的发生发展,在减少顺铂Cisplatin用量情况下达到有效的抗肿瘤作用,减轻大剂量化疗药的使用给患者带来的较大毒副作用,设计体内体外实验来验证这一假设。  方法:  1.MTT实验检测不同浓度Aspirin单独作用四种结肠癌细胞SW620、LoVo、RKO、DLD-148小时后的细胞活力,以及2mM Aspirin联合Cisplatin作用四种结肠癌细胞SW620、LoVo、RKO、DLD-148小时后的细胞活力。  2.克隆形成实验检测Aspirin联合Cisplatin对结肠癌细胞增殖能力的影响。观察Aspirin联合Cisplatin对结肠癌细胞生长形态的影响。  3.划痕实验、transwell基质胶侵袭实验检测Aspirin联合Cisplatin对结肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。Westernblot检测主要EMT蛋白的表达情况。  4.流式细胞术和AO/EB染色实验检测Aspirin联合Cisplatin对结肠癌细胞凋亡的诱导。Wesrernblot检测凋亡相关蛋白的表达情况。激光共聚焦免疫荧光实验检测细胞色素c线粒体外释情况。  5.Westernblot检测Aspirin联合Cisplatin联合作用48小时后,结肠癌细胞PI3K/AKT、RAF-MEK-ERK通路主要蛋白的表达情况。MTT检测PI3K抑制剂LY294002、MEK抑制剂U0126预处理后与联合用药共同作用结肠癌细胞48小时后的细胞活力。  6.Aspirin联合Cisplatin作用结肠癌细胞48小时后,westernblot分别检测胞质和细胞核中NF-κB通路相关蛋白的表达情况。激光共聚焦免疫荧光实验检测p65、p50蛋白在结肠癌细胞中的定位情况。  7.裸鼠皮下荷瘤实验,研究Aspirin和Cisplatin联合治疗对结肠癌异种移植肿瘤生长的影响。Westernblot、IHC实验检测肿瘤组织中PI3K/AKT、RAF-MEK-ERK和NF-κB通路相关蛋白的表达情况。  结果:  1.Aspirin可以促进Cisplatin对结肠癌细胞活力的抑制。联合2mM Aspirin使Cisplatin的IC50值明显降低。  2.Aspirin可以促进Cisplatin对结肠癌细胞增殖能力的抑制。Cisplatin联合Aspirin会使结肠癌细胞生长形态明显改变。  3.Aspirin可以促进Cisplatin对结肠癌细胞迁移、侵袭能力的抑制,主要EMT相关蛋白表达量明显降低。  4.Aspirin可以促进Cisplatin对结肠癌细凋亡的诱导,使得结肠癌细胞的内源性线粒体凋亡途径被激活。  5.Aspirin联合Cisplatin使得结肠癌细胞PI3K/AKT、RAF-MEK-ERK和NF-κB信号通路受到显著抑制。  6.阿司匹林和顺铂联合治疗可以在体内靶向PI3K/AKT、RAF-MEK-ERK和NF-κB信号通路显著抑制结肠癌异种移植肿瘤的生长。  结论:  本研究表明小剂量Aspirin可在体内体外靶向PI3K/AKT、RAF-MEK-ERK和NF-κB信号通路促进化疗药物Cisplatin对结肠癌发生发展的抑制。Aspirin可以作为辅助药物联合Cisplatin为结肠癌治疗提供新的方案,在达到同样治疗效果的同时,减轻了给患者带来的毒副作用。
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