不同激素和多胺类物质对牡丹胚性愈伤组织诱导的影响

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牡丹是我国特有的传统名花,但其育种周期长、繁殖系数低等问题,严重影响了牡丹的繁殖和生产。体胚发生作为植株再生的重要方式之一,在部分木本植物中已经取得成功,但目前关于牡丹体胚发生的研究报道较少。本研究以牡丹品种‘凤丹白’的鳞芽为外植体,在离体培养条件下,首先探讨不同激素配比及浓度对牡丹胚性愈伤组织诱导及其酶(POD、SOD、CAT)活性、可溶性蛋白含量的影响,并进行组织切片观察;研究不同多胺类物质及浓度对牡丹胚性愈伤组织诱导及其酶(POD、SOD、CAT、APX)活性、可溶性蛋白含量的影响,并进行组织切片观察;其次,在前两个试验的基础上,研究激素与多胺类物质配比及浓度对牡丹胚性愈伤组织诱导及其酶(POD、SOD、CAT、APX)活性、可溶性蛋白含量的影响,并进行组织切片观察,探求牡丹非胚性愈伤组织向胚性愈伤组织转化的可行条件,以期为建立稳定的牡丹体胚发生体系提供理论基础。主要结论如下:1.以牡丹愈伤组织为材料,研究NAA×6-BA、NAA×TDZ不同激素配比及浓度对牡丹胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明:激素的种类及浓度对牡丹胚性愈伤组织的形成有影响。其中以添加NAA0.2mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1的处理诱导效果最好,组织切片解剖结构观察发现,该处理条件下愈伤组织于诱导培养的第20d开始有胚性细胞形成,第25d出现大量胚性细胞,第30d有少量早期球形胚形成,在胚性愈伤组织形成过程中存在非胚性细胞与胚性细胞、早期球形胚共存的现象。POD活性在0-20d变化较剧烈,20-25d迅速上升并达到最大值,25-30d略有下降,但仍维持在较高水平。SOD在诱导培养的0-5d迅速上升,5-20d始终维持在较高水平,20-25d有所下降,25-30d略有回升。CAT活性在0-20d变化较剧烈,在20-25d迅速上升达到最大值,25-30d迅速下降。可溶性蛋白在0-10d变化平缓,10-15d上升并达到峰值,15-20d下降后再次上升,于第25d达到第二个高峰,然后下降。2.以牡丹愈伤组织为材料,在未添加激素的条件下,研究不同浓度的腐胺(Put)、亚精胺(Spd)对牡丹胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明:多胺类物质的种类及浓度对牡丹胚性愈伤组织的诱导有影响。其中以添加Put浓度为5mg·L-1的处理诱导效果最好,组织切片解剖结构观察发现,该处理条件下愈伤组织于诱导培养的第25d开始有胚性细胞形成,第30d有大量胚性细胞出现,在胚性愈伤组织形成过程中存在非胚性细胞与胚性细胞共存的现象。POD活性在0-10d先上升后下降,从第10d开始,逐步升高,于第30d达到最大值。SOD活性在诱导培养的前20d呈波浪上升趋势,于第20d达到最大值后逐步下降。CAT在诱导培养的0-25d变化较平缓,25-30d迅速上升。APX在诱导培养过程中变化较剧烈,0-15d先下降后上升,于第15d达到峰值后下降,25-30d再次上升。可溶性蛋白含量在0-10d先上升后下降,从第10d开始整体呈上升趋势,其中20-25d略有下降,于第30d达到最大值。3.以牡丹愈伤组织为材料,在添加激素的基础上,研究不同浓度的腐胺、亚精胺对牡丹胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明:各处理胚性愈伤组织诱导效果不理想,不适于牡丹胚性愈伤组织的诱导。
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