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目的: 树突状细胞(DC)是功能最强的专职抗原递呈细胞,在抗肿瘤免疫中起着重要作用。体外培养扩增大量DC将极大方便DC的基础和临床研究。我们应用不同因子组合体外培养正常和慢性髓系白血病(CML)CD34~+细胞,探讨先扩增再诱导的两步法方案诱导DC的可行性,并比较CML-DC和正常DC的生物学特性,为CML的DC免疫治疗提供实验依据。 方法: 免疫磁珠法从正常和CML患者骨髓获得CD34~+细胞,在有血清或无血清条件下用SCF+FL+TPO+IL-3扩增2周,然后以GM-CSF+IL-4+TNF-α(GI方案)或GM-CSF+TNF-α(GT方案)诱导DC。或者SCF+FL+TPO+IL-3+GM-CSF+TNF-α直接作用2周扩增诱导DC。相差显微镜动态观察细胞形态,台盼兰拒染试验检测细胞活率,流式细胞仪(FCM)分析细胞表型,FITC-DX内吞实验检测抗原摄取能力,混合淋巴细胞培养(MLR)检测异基因T细胞刺激能力,荧光原位杂交(FISH)检测培养前后CML细胞的bcr/abl融合基因。 结果: 1.诱导后培养细胞出现典型的DC形态变化。 2.诱导后细胞较0天或诱导前细胞高表达DC相关标记(CD1a、CD80、CD86、CD40、CD54、HLA-DR)。正常人CD34~+细胞GI方案诱导7天、10天,细胞总数分别扩增284±311倍和198±178倍,CD1a阳性率为47.24%±0.07%和54.35%±16.34%,CD1a~+DC数是0天接种细胞的134±147倍和122±129倍。正常人CD34~+细胞GT方案诱导7天、10天,细胞总数分别扩增916±192倍和2887±1492倍,CD1a阳性率为16.96%±4.34%和7.71%±3.10%,CD1a~+DC数是0天接种细胞的